Экспресс тест на сифилис: эффективность диагностики и правила проведения анализа крови РПГА

Экспресс тест на сифилис: эффективность диагностики и правила проведения анализа крови РПГА

Если Вы врач, то после регистрации на сайте Вы получите доступ к специальной информации.

Если Вы уже зарегистрированы, введите имя и пароль (форма в верхнем правом углу или здесь).

Опыт применения иммунохроматографического экспресс-теста для диагностики сифилиса

ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО ЭКСПРЕСС-ТЕСТА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА

Новосёлов В.С., Федосеев А.С.

ММА им. И.М.Сеченова, ФГУ «Клинический санаторий «Барвиха» Управделами Президента РФ, г. Москва

Несмотря на то что уровень заболеваемости сифилисом в последние годы существенно снизился, эпидемиологическая ситуация в стране остается напряженной в связи с изменением структуры заболеваемости по формам данной инфекции — увеличением доли скрытых форм болезни. При этом важная роль в своевременном выявлении болезни принадлежит скрининговым лабораторным методам, которые не требуют дополнительного лабораторного оборудования и вместе с тем обеспечивают получение адекватных диагностических результатов уже в процессе приема пациента. В связи с этим актуальность поиска новых диагностических методик сохраняет свою актуальность.

Имеются сообщения (Ротанов С. В., Фриго Н. В., Клюева В. И., 2006, 2008) о высококачественном иммунохроматографическом экспресс-тесте, каким является диагностическая тест-система «Determine Syphilis TP» (Inverness Medical Japan Co.Ltd.) для определения антител к антигенам возбудителя сифилиса в сыворотке, плазме, а также в цельной крови человека.

С целью оценки чувствительности и специфичности тест-системы «Determine Syphilis TP» на базе ФГУ «Клинический санаторий «Барвиха» и клиники кожных и венерических болезней ММА им. И. М. Сеченова были проведены исследования сывороток крови от 161 пациента, 51 из которых страдал различными формами сифилиса. Группа контроля (здоровые) была представлена 110 пациентами. Возраст пациентов колебался от 13 до 68 лет, из них женщин было 74, мужчин — 87 человек. Сыворотки крови от больных сифилисом подвергались исследованиям в трепонемных тестах (РИФ, РПГА, РИБТ, ИФА) для выявления трепонемоспецифических антител; кроме этого, изучались реагиновые антитела (РМП, РСК с кард. АГ).

Иммунохроматографический анализ проводился на специальной пористой узкой тест-полоске, куда наносилась исследуемая сыворотка крови. Специфические антитела, содержащиеся в образце, связываются с конъюгатом антигенов бледной трепонемы и коллоидным селеном, образуя иммунные комплексы. Продолжая мигрировать вдоль материала тест-полоски, иммунные комплексы достигают зоны учета результатов, где нанесены иммобилизированные лизатные антигены бледной трепонемы. В этом месте происходит вторичное связывание образованных ранее иммунных комплексов за счет свободных валентностей антитрепонемных антител с формированием более сложных комплексов, что проявляется в этой зоне тест-полоски в виде полосы красного цвета различной интенсивности. Компоненты образца при достижении зоны внутреннего контроля теста вступают во взаимодействие с нанесенным в этом участке авидином, что приводит к появлению красной полосы в данной зоне. При отсутствии трепонемных антител образования комплексов в зоне учета результатов исследования не происходит и формируется окрашенная полоса только в зоне учета внутреннего контроля теста, что говорит о правильном проведении процедуры исследования.

Результаты комплексного серологического исследования иммунохроматографического экспресс-теста («Determine Syphilis TP») для определения антител к антигенам бледной трепонемы по чувствительности и специфичности дали 100%-ный результат.

Результаты данной работы позволили выявить преимущества скринингового обследования пациентов на сифилис при использовании иммунохроматографического анализа, которые заключались в простоте исполнения анализа, отсутствии необходимости приобретения дополнительного дорогостоящего лабораторного оборудования, быстрой и несложной интерпретации результатов, высокой чувствительности и специфичности метода, невысоких экономических затратах на расходные материалы.

Анализ крови на сифилис

Тестирование крови на сифилис проводится в рамках скрининга населения, его могут потребовать при постановке на учет в любом медицинском учреждении, в кожно-венерологический диспансер или в женской консультации. При назначении пациенту лабораторного обследования по поводу сифилиса не следует забывать о том, что абсолютным критерием постановки диагноза является непосредственное выявление возбудителя заболевания – бледной трепонемы (T. pallidum) или его генетического материала.

После инфицирования пострадавший начинает представлять существенную опасность для окружающих. Чтобы предотвратить самое худшее, рекомендуется соответствующее тестирование сразу же после обнаружения характерных симптомов.

В противном случае инфекция станет провокатором ухудшения общего состояния здоровья, разрушительно действуя на системы организма.

Сифилис может протекать тяжелее при одновременной ВИЧ-инфекции; в этих случаях поражения глаз, менингит и другие неврологические осложнения более распространены и более серьезны, тогда без адекватного лечения прогноз течения заболевания, как правило, неблагоприятный.

Известны научные исследования о пагубном воздействии сифилиса на будущее потомство потерпевшего. Объясняется это тем, что инфекция может влиять на генетический аппарат и повреждать хромосомы.

Эпидемиологическая ситуация продолжает оставаться напряженной: в структуре сифилиса преобладают скрытые формы, растет число поздних форм инфекции, что диктует необходимость усиления эпидемиологического контроля над распространением заболевания и широкого применения специфических методов лабораторной диагностики сифилиса.

Исследование крови

Первой серологической реакцией для диагностики сифилиса была реакция связывания комплемента, предложенная в 1906 г. Вассерманом, Нейссером и Бруком Однако в настоящее время этот метод, ставший в свое время революционным и положивший начало серологической диагностике сифилиса, считается морально устаревшим: он длительно выполняется, субъективно интерпретируется, часто дает ложноотрицательные и ложноположительные результаты и не подлежит стандартизации.
В зависимости от стадии заболевания определяется последующая терапия, но для установления стадии необходимы специфичные методы лабораторной диагностики сифилиса.

Так, при первичном сифилисе после инкубационного периода в 3–4 недели (диапазон 1–13 недель), основное поражение (твердый шанкр) развивается на месте проникновения. Начальная красная папула быстро формирует твердый шанкр, обычно безболезненную язвочку с устойчивой основой; при натирании вытекает чистая жидкость, содержащая множество спирохет. Соседние лимфоузлы могут быть увеличены, тверды и безболезненны.

Около половины инфицированных женщин и треть инфицированных мужчин не знают о наличии шанкра, потому что он почти не вызывает симптомов. Шанкры в прямой кишке или во рту, как правило, возникают у мужчин и часто остаются незамеченными. Шанкр обычно заживает через 3-12 недель. После этого люди выглядят полностью здоровыми, но являются источником инфицирования. Диагностирование заболевания на начальной стадии поражения, позволит достигнуть наиболее высокой продуктивности последующей программы терапии. Но при игнорировании первичной тревожной симптоматики развивается вторичный сифилис.

Ему свойственно появление особенной кожной сыпи, так званый сифилитический дерматит обычно симметричен и более выражен на ладонях и подошвах ног. Отдельные поражения круглые, часто шелушатся и могут сливаться, что приводит к еще большим поражениям, но они обычно не зудят и не причиняют боль. После исчезновения поражений эти зоны могут быть светлее или темнее, чем в норме. Если затронут скальп, часто бывает фокальная алопеция. Также отмечаются гипертрофические, сглаженные, темно-розовые или серые папулы в слизисто-кожных областях и влажных местах на коже (например, в перианальной области, под грудью); поражения чрезвычайно заразны. Поражения рта, горла, гортани, члена, вульвы или прямой кишки обычно круглые, с приподнятыми краями и часто серо-белые с красной границей. Поэтому пострадавший становится крайне заразным, представляя существенную угрозу для окружающих. Вторичный сифилис может поражать многие другие органы.

Отдельно рассматривается латентная стадия сифилиса, которая может быть, ранней (меньше 1 года после заражения) или поздней (больше одного года после заражения). Обнаружить их можно выявлением антител специфическими лабораторными тестами. Но бессимптомное течение еще не говорит о том, что пострадавший перестал быть заразным. Особенно опасной является возможность передачи инфекции от матери плоду.

Поздняя или третичная стадия развивается приблизительно у одной трети невылеченных людей, но не раньше, чем через годы – десятилетия после начальной инфекции. Включает тяжелые кожные поражения, разрушение мозга, костей и внутренних органов.

Основой для современной тактики обследования предполагаемого больного является не только осмотр и анамнез. Сегодня главным инструментом в установлении точного диагноза являются диагностические серологические тесты на сифилис.

Речь идет о выявлении антитрепонемных антител классов IgG и IgM. Трепонемные тесты являются качественными, очень специфичными для сифилиса и включают:

• флуоресцентный анализ на абсорбцию трепонемных антител;
• реакцию микрогемагглютинации на антитела к T. pallidum;
• реакцию пассивной гемагглютинации с T. pallidum;
• иммуноферментный анализ на определение T. pallidum (ИФА);
• иммунохемилюминесцентный анализ (ИХЛА).

Второй подход (нетрепонемный, реагинный анализ) предусматривает обнаружение реагина (антител человека, которые связываются с липидами) применяют антигены липида (кардиолипин бычьего сердца). Антикардиолипиновый тест является чувствительным, простым и недорогим реагиновым тестом который используется для скрининга, но не полностью специфичным для сифилиса. Результаты могут быть представлены качественно (например, реактивный, слабо реактивный, пограничный или нереактивный) и количественно как титры (например, положительный в растворе 1:16).
Ни реагинный, ни трепонемный тест не будет положительным до 3–6 недели после начальной инфекции. Таким образом, отрицательный результат распространен при раннем первичном сифилисе и не исключает сифилиса до окончания 6 недели. После эффективного лечения титры реагиновых антител, как правило, уменьшаются по крайней мере в 4 раза становясь отрицательными к 1 году при первичном и ко 2 году при вторичном сифилисе, однако, низкие титры (≤ 1:8) могут сохраняться примерно у 15% пациентов. Трепонемные анализы обычно остаются положительными в течение многих десятилетий, несмотря на эффективное лечение, и, таким образом, не могут быть использованы для оценки эффективности.
Выбор тестов и интерпретация их результатов зависят от различных факторов, в том числе от возможного инфицирования и результатов тестов, а также от того, повторное ли это заражение.
Реагиновые тесты выполняются у ранее переболевших сифилисом. Увеличение титра в 4 раза свидетельствует о новой инфекции или неудачном лечении.
Трепонемные и реагиновые тесты выполняются, если у пациентов ранее не было сифилиса. Результаты тестов определяют следующие шаги:

• Положительные результаты в обоих тестах: данные результаты свидетельствуют о новой инфекции;
• Положительные результаты по трепонемному тесту, но отрицательные результаты по реагиновому тесту: проводится второй трепонемный тест, чтобы подтвердить его положительный результат. Лечение не показано, если результаты реагинового теста повторно отрицательные;
• Положительные результаты по трепонемному тесту, отрицательные результаты по реагиновому тесту, но в анамнезе подтверждено недавнее заражение: реагиновый тест повторяют через 2-4 недели после заражения, чтобы убедиться, не обнаружена ли какая-нибудь новая инфекция.

Особенности исследования

В зависимости от выбранного метода анализа, будет колебаться его ценовая политика. При скрининговом обследовании в диспансере цена обычно определяется стоимостью шприца для забора биологического материала. Однако современные исследования в частных центрах, либо оценка состояния больного посредством инновационных техник, может оказаться на порядок дороже. Поэтому точно узнавать, сколько стоит манипуляция, лучше заблаговременно.

При определении возбудителя, а также стадии развития поражения в реагиновом и трепонемном тесте выявление антител будет эффективным только после хотя бы трех – пяти недель после незащищенного полового акта.

В противном случае невозможно получение четкой клинической картины. Это связано со сроками формирования сифилитической язвы, в месте проникновения инфекции в организм.

Поэтому использование экспресс-теста в более ранние сроки для предварительной оценки закончится лишь пустой тратой денег.

Кровь для анализа забирается из большой вены в зоне локтевого сгиба.

Иногда на месте укола потом образуется синяк, либо в процессе сбора материала человек испытывает ощущение, похожее на жжение. Но подобные явления – вполне нормальная реакция организма на внешнее вмешательство.

Согласно протоколу, потерпевший сдает кровь для анализа натощак. Это означает, что последний прием пищи следует проводить хотя бы за восемь часов до процедуры, чтобы избежать попадания в биологическую жидкость растворенных жировых компонентов принятой пищи.

Чтобы не переделывать все заново из-за собственной невнимательности, подготовка должна проводиться особенно тщательно.

Группы риска

Обычно проходить проверку на заражение сифилисом всех подряд не посылают. Существует целый перечень групп риска, кому потребуется отправиться на диагностику, как правило это те, кто имел незащищенный половой контакт с незнакомым сексуальным партнером.

Кроме этого выделяются несколько категорий, которым необходимо пройти исследование:

• донорам крови и органов;
• беременным или тем, кто планирует беременность;
• в качестве подготовительного этапа перед хирургическим вмешательством;
• работникам с повышенной вероятностью инфицирования.

В последнем случае правило распространяется на медицинский персонал, которому приходится ежедневно сталкиваться с инфицированными больными.

Отдельно рассматриваются ситуации, когда проверка необходима новорожденным вследствие того, что мать в момент вынашивания плода была инфицированной. Анализ позволит исключить риски возможного врожденного сифилиса.

Но чаще всего диагностика необходима при следующих симптомах:

• язвы в области половых органов;
• выделения из гениталий;
• сыпь на коже;
• увеличенные лимфатические узлы;
• костные боли.

При фиксации хотя бы нескольких признаков из перечисленных выше, целесообразно обратиться за квалифицированной консультацией к узкопрофильному врачу.

Ложные результаты

Выбор тестов и интерпретация их результатов зависят от различных факторов, в том числе от возможного инфицирования и результатов тестов, а также от того, повторное ли это заражение. В лабораторной диагностике всегда сохраняется риск погрешности и на него приходится около 5% от общего числа диагностируемых случаев.

При фиксации ложноположительного результата, следует учитывать, что на результативность могут влиять различные диффузные болезни соединительной ткани. Даже классический артрит ревматоидного типа может повлиять на достоверность полученной информации. То же самое касается системной красной волчанки.

Мешают диагностике также сахарный диабет или недавно проведенная вакцинация пациента, ряд инфекционных болезней тяжелого течения вроде мононуклеоза или туберкулеза. Вирусный гепатит или болезни сердечной мышцы также способны повлиять на качество предоставляемых результатов, особенно это касается эндокардита.

Люди, которые страдают алкоголизмом на самых запущенных стадиях, либо принимающие различные наркотики, тоже подвержены риску получить недостоверный результат.

Намного реже встречаются ситуации, где фигурируют ложноотрицательные значения. Причиной, вероятнее всего, являются слишком ранние сроки диагностики. Иногда, такой результат прослеживается у пациентов с поздней стадией сифилиса, когда выработка антител практически подавлена.

Схематическая расшифровка

Приблизительно в 90% всех фиксируемых случаев первичный сифилис успешно диагностируется в стандартной реакции Вассермана. Но только при условии ее проведения хотя бы с шестой недели после предполагаемого незащищенного сексуального контакта.

Среднестатистическая реакция предусматривает отсутствие ярко выраженных показателей в первые 15-17 дней. Но вот уже на пятой неделе около четверти испытуемых могут получить предварительный результат. Однако более достоверным он будет по окончанию восьмой недели.

На стадии вторичного сифилиса уже нет зависимости от временных интервалов. Процедура без существенных препятствий выявит возбудителей, если они присутствуют в организме.

На этой стадии диагностика осуществляется на основании нескольких серологических реакций, что позволит определить срок инфицирования.

Особенное внимание стоит уделить сифилитической инфекции на четвертой неделе заболевания, когда проявляется первичная сифилома. В этот момент реакция Вассермана переходит из отрицательной в положительную, закрепляясь на все оставшееся время, пока проходит стадия вторичного свежего и вторичного рецидивного течения.

Когда речь заходит о вторичном периоде без лечения, то RW иногда все же способна возвращаться к отрицательному показателю, но при клиническом рецидиве сифилиса, она опять становится положительной.

На этом фоне важны рекомендации, что скрытый период заболевания крайне коварен и отрицательная реакция Вассермана не указывает на окончательное излечение. Единственным положительным аспектом при условии ранее назначенного и тщательно исполняемого лечения тут выступает благоприятный прогноз на дальнейшую реабилитацию.

Что касается активного поражения при третичной стадии, здесь положительный результат прослеживается в большей части анализов, выполненных среди больных. Но после угасания активных проявлений на третичной стадии, реакция становится отрицательной.

Подобные колебания иногда ставят в тупик даже опытных специалистов, поэтому не следует пытаться самостоятельно расшифровать документ из лаборатории и довериться рекомендациям лечащего врача, особенно для случаев серорезистентной формы. Она свидетельствует о неэффективности противосифилитической терапии и что циклично проверять динамику в такой ситуации – неинформативно.

Лучше сосредоточиться на дальнейшей программе восстановления, следуя медицинским предписаниям.

После завершения процедуры забора крови рекомендуется придерживаться весь день рационального питания и употреблять больше жидкости, исключить алкоголь и интенсивные физические нагрузки, можно побаловать себя вместо этого кусочком шоколада и теплым чаем.

1. СПб ГБУЗ “Кожно-венерологический диспансер № 4”. – Сифилис. Иммуноферментный анализ на выявление суммарных антител класса M и G к возбудителю сифилиса.
2. “Синэво”. – Сифилис RPR (Rapid Plasma Reagin).

Больше свежей и актуальной информации о здоровье на нашем канале в Telegram. Подписывайтесь: https://t.me/foodandhealthru

Специальность: инфекционист, гастроэнтеролог, пульмонолог .

Общий стаж: 35 лет .

Образование: 1975-1982, 1ММИ, сан-гиг, высшая квалификация, врач-инфекционист .

Сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), титр

Выявление в сыворотке крови специфических антител к бледной трепонеме (Treponemapallidum), используемое для подтверждения результатов неспецифических тестов на сифилис, скрининга сифилиса, обследования контактных лиц и доноров крови.

Синонимы русские

Люэс, бледная трепонема.

Синонимы английские

Syphilis, passive hemagglutination test; Syphilis, indirect hemagglutination test; Treponema Pallidum Hemaglutination Assay, TPHA.

Метод исследования

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Сифилис – инфекция, передающаяся половым путем, возбудителем которой является спирохета Treponema pallidum subspecies pallidum. Попадание этой бактерии в организм приводит к развитию иммунного ответа, сопровождающегося выработкой как неспецифических («нетрепонемных»), так и специфических («трепонемных») антител. Выявление антител к T. pallidumсоставляет основу лабораторного подтверждения сифилиса. В зависимости от типа антител, определяемых в реакции, серологические исследования разделяют на неспецифичексие («нетрепонемные») и специфичексие («трепонемные»). Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) относится к «трепонемным», то есть специфическим в отношении T. pallidum тестам.

РПГА основана на феномене агглютинации эритроцитов, на поверхности которых адсорбированы антигены T. pallidum (реагент РПГА), при добавлении к ним сыворотки больного сифилисом, содержащей специфические антитела к спирохете. Такие антитела появляются в крови пациентов с сифилисом через 2 (IgM) и 4 (IgG) недели после инфицирования. Следует отметить, что этот период может удлиняться до 6 недель. Поэтому чувствительность РПГА в первичном периоде сифилиса несколько уступает чувствительности этого метода во вторичном и третичном периодах и составляет около 86 %. Преимуществом РПГА является высокая специфичность (96-100 %), позволяющая использовать этот анализ в качестве подтверждающего теста после положительного результата какого-либо неспецифического, «нетрепонемного» исследования (например, антикардиолипинового теста, RPR). Чувствительность РПГА во вторичном, третичном периоде сифилиса, а также при скрытом сифилисе составляет 99-100 %.

Чувствительность РПГА и других «трепонемных» тестов превосходит чувствительность неспецифических («нетрепонемных») тестов, таких как микрореакция преципитации (МРП) с кардиолипиновым антигеном. Поэтому в последнее время в качестве скринингового теста на сифилис стали чаще применять «трепонемные» тесты, в том числе РПГА. При положительном результате скринингового исследования на сифилис с помощью РПГА следует провести подтверждающий тест. В этом случае им является любой другой «трепонемный» тест, но не РПГА (например, иммуноферментный анализ).

Как правило, результат РПГА остается положительным даже после лечения сифилиса. Исключение составляет ситуация, когда терапия была проведена в самом начале заболевания. Так как результат сохраняется положительным пожизненно, РПГА не предназначена для дифференциальной диагностики раннего и позднего сифилиса. По этой же причине данное исследование не используют, чтобы оценивать эффективность лечения заболевания.

При добавлении сыворотки больных сифилисом к реагенту РПГА происходит агглютинация (склеивание) и выпадение в осадок эритроцитов. Степень агглютинации зависит от концентрации антител в сыворотке, поэтому РПГА позволяет не только выявить присутствие антител, но и определить их количество. Результат анализа представлен в виде титра антител. Любой положительный титр указывает на возможную инфекцию T. pallidum, однако возможны ложноположительные реакции. Значительно повышенные показатели характерны для вторичного и скрытого раннего сифилиса.

Ложноположительные результаты РПГА наблюдаются в 0,05-2,5 % случаев и чаще всего обусловлены наличием в сыворотке пациента аутоантител (при системных заболеваниях соединительной ткани, например при системной красной волчанке), антител к другим возбудителям, схожим по антигенной структуре с T. pallidum (Borrelia burgdorferi, сапрофитные трепонемы полости рта и гениталий), а также другими физиологическими и патологическими состояниями (беременность, онкологические заболевания, острый инфаркт миокарда). Как правило, титр ложноположительной реакции РПГА низкий. Исключение составляют результаты РПГА у пациентов с диффузными заболеваниями соединительной ткани и злокачественными новообразованиями, когда титр антител может достигать очень высоких значений. Ложноположительные реакции негативируются спонтанно и бесследно в течение 4-6 месяцев (острая ложноположительныя реакция, часто на фоне беременности) или более длительного периода (хроническая ложноположительная реакция).

Учитывая эти особенности, результат РПГА следует интерпретировать с учетом дополнительных анамнестических и лабораторных данных. При подтверждении диагноза «сифилис» необходимо исключить наличие других инфекций, передающихся половым путем, а также обследовать всех половых партнеров и членов семьи пациента.

Для чего используется исследование?

• Чтобы подтвердить диагноз «сифилис» при положительном результате неспецифического скринингового теста;
• для скрининга сифилиса;
• для обследования лиц, находившихся в половом и тесном бытовом контакте с больным сифилисом;
• для исключения сифилиса у донора крови.

Когда назначается исследование?

• пациента с клиническими признаками сифилиса (безболезненный эрозивный или язвенный дефект на твердом основании) и регионарной лимфаденопатии (первичный сифилис), полиморфная кожная сыпь, многоочаговая или диффузная алопеция, сифилитическая лейкодерма (вторичный сифилис), плотноэластический узел с распадом или формированием «сухого» рубца (третичный сифилис);
• лиц, находившихся в половом и тесном бытовом контакте с больным сифилисом;
• донора крови;
• при ежегодном профилактическом обследовании, госпитализации в стационар, оформлении санитарной книжки.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

• первичный, вторичный, третичный, а также скрытый сифилис (приобретенный и врожденный);
• беременность; ;
• гепатиты В и С;
• употребление инъекционных наркотиков;
• острый инфаркт миокарда;
• диффузные заболевания соединительной ткани;
• возвратный тиф;
• лептоспироз;
• клещевой боррелиоз;
• тропические трепонематозы (фрамбезия, беджель, пинта);
• воспалительные процессы, обусловленные сапрофитными трепонемами полости рта и гениталий;
• злокачественные новообразования;
• обширная травма и переломы;
• бактериальный эндокардит;
• туберкулез;
• инфекционный мононуклеоз;
• поствакцинальная реакция.

Причины отрицательного результата:

• отсутствие сифилиса;
• первые 2-4 недели после инфекции T. pallidum;
• неправильное взятие материала на исследование.

Что может влиять на результат?

• Результат анализа может быть ложноотрицательным в течение первых 2-4 (до 6) недель после заражения.

Важные замечания

• Исследование не позволяет дифференцировать;
  • сифилис (T. pallidum) и другие трепонематозы (T. pallidumsubspeciespertenue, endemicum, carateum);
  • ранний и поздний сифилис.

  Также рекомендуется

  Кто назначает исследование?

  Дерматовенеролог, невролог, врач общей практики, эпидемиолог.

  Литература

  • French P, Gomberg M, Janier M, Schmidt B, van Voorst Vader P, Young H; IUST. IUSTI: 2008 European Guidelines on the Management of Syphilis. Int J STD AIDS. 2009 May;20(5):300-9.
  • Seña AC, White BL, Sparling PF. Novel Treponema pallidum serologic tests: a paradigm shift in syphilis screening for the 21stcentury. Clin Infect Dis. 2010 Sep 15;51(6):700-8.
  • Luger A. Diagnosis of syphilis. Bull World Health Organ. 1981;59(5):647-54.
  • Holmes K.K. Sexually Transmitted Diseases / K.K. Holmes, P.F. Sparling, W.E. Stamm; 4th ed. — McGraw-Hill, 2008.

  Подписка на новости

  Оставьте ваш E-mail и получайте новости, а также эксклюзивные предложения от лаборатории KDLmed

  Что такое анализ крови РПГА

  Анализ крови РПГА расшифровывается как реакция прямой гемагглютинации. Это метод исследования, при котором проверяется реакция крови пациента на антигены, являющиеся компонентами бактериальных вакцин или экстрактов. Обычно анализ используется для выявления сифилиса.

  Принцип проведения анализа

  Возбудитель сифилиса – это бактерия, бледная трепонема. При попадании в организм человека эта спирохета провоцирует выработку трепонемных и нетрепонемных антител в крови больного. Исследование методом РПГА проводится путем забора у пациента венозной крови. К полученному биоматериалу добавляется специальная сыворотка с антигеном. При наличии заболевания эритроциты из образца крови пациента начинают склеиваться друг с другом.

  

  РПГА анализ крови при беременности

  С помощью этого теста с 90% вероятностью удается обнаружить возбудителя заболевания на любом из четырех этапов развития сифилиса. Определяется при этом и уровень специфических антител в крови, по которым можно определить стадию заболевания. Также анализ РПГА позволяет выявить ложноположительные результаты исследований на сифилис, полученные во время проведения скрининговых тестов при беременности.

  Расшифровка результатов

  При проведении анализа крови подсчитывается количество склеенных и выпавших в осадок эритроцитов. Результат исследования представляется как уровень титра антител и определяется как:

  • положительный;
  • ложноположительный;
  • отрицательный.

  При титре от 1:2 до 1:800 устанавливается подозрение на сифилис, что означает наличие в организме пациента антител к трепонеме. Однако это не указывает на присутствие болезни у человека. На первой стадии развития сифилиса показатели редко достигают уровня в 1:320. Вторая стадия заболевания определяется титрами, немного превышающими показатели в 1:320. При третьей, скрытой стадии болезни, показатели снова могут упасть ниже 1:320. Высокий уровень титра, превышающий показатели в 1:640, обычно выявляется при высокой активности инфекции.

  Ложноположительными обычно являются показатели, превышающие значение 1:800. Также неспецифическими или ложноположительными могут быть значения менее 1:640. Подобные ситуации возможны при наличии таких факторов:

  • поствакцинальный период;
  • менструации;
  • беременность;
  • аутоиммунные заболевания;
  • употребление жирной пищи накануне анализа;
  • онкология;
  • перенесенный за прошедшие 6–8 месяцев инфаркт миокарда;
  • любые инфекционные заболевания;
  • туберкулез;
  • хронические патологии работы внутренних органов.

  В том случае, когда пациент когда-либо ранее перенес сифилис, анализ РПГА у него будет положительным пожизненно, даже если человек здоров. Потому для уточнения ложноположительных и положительных результатов назначается дополнительное исследование в виде анализов крови РМП или РПР. Если РПР либо РМП отрицательный, то болезнь у пациента отсутствует.

  При отрицательной реакции эритроциты не склеиваются в структуру. Такой результат проводимых исследований возможен в том случае, если болезнь у пациента отсутствует. Однако отрицательная реакция может проявиться и тогда, когда кровь для проведения исследования взята неправильно, либо с момента инфицирования прошло не более 4 недель и организм не успел начать выработку антител.

  Довольно часто результаты теста записываются с условными обозначениями:

  При этом 2+ означает, что наблюдается слабовыраженная реакция теста. Значение 3+ это положительная реакция, а показатель 4+ соответствует титрам с высокими результатами.

  

  Возбудитель сифилиса, определяемый с помощью анализа крови РПГА

  Правила сдачи анализа

  Точность результатов исследования напрямую зависит от того, как проводится сбор анализов. И немалую роль в этом играет подготовка пациента к процедуре. Существует несколько правил, которых следует придерживаться для получения достоверных данных:

  • сдавать биоматериал на определение антител к сифилису следует только в специализированных клиниках. Лучше всего это делать в КВД (кожно-венерологическом диспансере);
  • не проводить исследования накануне менструации и во время нее;
  • при любых бактериальных или инфекционных заболеваниях, включая ОРЗ и грипп, анализ не сдавать. Забор крови должен осуществляться не ранее, чем через 1–1,5 недели после полного излечения или периода вакцинации;
  • недопустимо употребление алкоголя на протяжении 4–6 дней до сдачи биоматериала;
  • за 1 час до сдачи анализа нельзя курить;
  • в течение суток перед исследованием не разрешается употреблять жирную, жареную и копченую пищу;
  • забор крови проводится строго натощак. Допускается только употребление небольшого количества простой воды без газа.

  При необходимости приема каких-либо лекарственных препаратов на момент сдачи анализа об этом факте нужно сообщить назначающему исследование врачу. Также при плохом самочувствии, возникшем перед забором крови, о недомогании обязательно следует проинформировать медсестру, проводящую манипуляции.

  В каких случаях назначается РПГА

  Исследование РПГА может проводиться не только для выявления сифилиса. Анализ способствует диагностике таких бактериальных инфекций,:

  • сальмонеллез в пищеварительной системе. На присутствие паразитов в организме указывает титр от 1:2 до 1:800;
  • дифтерия. Заболевание подтверждается при наличии показателей в 1:800;
  • дизентерия. Анализ РПГА позволяет выявить не только острую форму патологии, но и хронически тип инфекционного заболевания, а также выявить конкретный тип возбудителя. У детей патология подтверждается при титре в 1:800, а у взрослых со значениями 1:320;
  • корь.

  Метод диагностики РПГА, при использовании различных реагентов, позволяет провести разностороннюю диагностику состояния здоровья пациентов любого возраста. Это обеспечивает возможность своевременного обнаружения опасных состояний и грамотного подбора методов их терапии, что особо важно по отношению к беременным женщинам, маленьким детям, а также лицам, работающим с ними.

  Видео

  

  

  * Представленная информация не может быть использована для самостоятельной постановки диагноза, определения лечения и не заменяет обращение к врачу!

  Экспресс тест на сифилис: эффективность диагностики и правила проведения анализа крови РПГА

  

  Сифилис представляет собой венерическое заболевание, возбудителем которого является бледная трепонема (Тreponema pallidum).

  Механизм передачи возбудителя – контактный

  Пути заражения сифилисом:
  • Половой (вероятность заражения при однократном половом контакте составляет 60%)
  • Трасплацентарный (от матери к плоду)
  • Гемотрансфузионный (при переливании крови или ее компонентов)
  • Бытовой (через предметы общего пользования – полотенце, зубная щетка, бритва)
  • Профессиональный (в группе риска – медицинский персонал)

  Основным путем передачи сифилиса является половой путь (98% всех случаев инфицирования).

  Методы лабораторной диагностики сифилиса:
  Методы лабораторной диагностики сифилиса разделяют на 2 группы:
  1. Трепонемные тесты позволяют определять антитела к антигенам бледной трепонемы. Поэтому данные тесты являются более специфичными и чувствительными в сравнении с нетрепонемными тестами. К трепонемным тестам относятся иммуноферментный анализ (ИФА) и реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Методы ИФА и РПГА являются обязательными для подтверждения диагноза, однако они также широко применяются в качестве скрининговых (отборочных) тестов. После проведенного лечения трепонемные тесты могут сохранять позитивность в течение долгого времени, зачастую в течение всей жизни. Поэтому для оценки ситуации – новое заражение или состояния после лечения – одновременно с трепонемными применяются и нетрепонеменые тесты.
  2. Нетрепонемные тесты – выполняются как правило в специализированных лабораториях Кожно-венерологических диспансеров при положительных результатах скрининговых трепонемных тестов, а также для оценки эффективности проведенного лечения. «Лаборатория Диалайн» не выполняет нетрепонемные тесты на сифилис.

  Правила подготовки к забору крови для проведения лабораторных исследований на сифилис:
  • Взятие крови необходимо проводить утром натощак, после 8-14 часов ночного периода голодания.
  • Прием препаратов накануне или в день исследования необходимо согласовать с лечащим врачом.
  • Накануне рекомендуется исключить повышенные психоэмоциональные и физические нагрузки (спортивные тренировки), а также приём алкоголя

  1.1 Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА)
  
  Показания к проведению исследования:
  • Подтверждение диагноза «сифилис» при положительном результате неспецифического скринингового теста
  • Cкрининговое (отборочное) обследование на выявление сифилиса
  • Обследование лиц, находившихся в половом и тесном бытовом контакте с больным сифилисом
  • Исключение сифилиса у донора крови

  Результат РПГА остается положительным даже после лечения сифилиса. Исключение составляет ситуация, когда терапия была проведена в самом начале заболевания. Так как результат сохраняется положительным пожизненно, РПГА не предназначена для дифференциальной диагностики раннего и позднего сифилиса.

  Референсные значения: отрицательно.

  1.2 Иммуноферментный анализ (ИФА)
  
  Среди всех методов лабораторной диагностики сифилиса одним из наиболее распространенных является метод ИФА.
  Лаборатория Диалайн выявляет суммарные антитела (IgM+IgG) к бледной трепонеме, результат выдаётся в терминах «положительно» или «отрицательно».

  Показания к проведению исследования:
  
  • Подготовка к госпитализации
  • Подготовка к оперативному вмешательству
  • Обследование беременных женщин
  • После незащищенного полового контакта с новым партнером
  • Обследование доноров крови
  • Медицинские осмотры

  Результат анализа не является диагнозом. В случае получения результата «положительно» необходимо обратиться в Кожно-Венерологический диспансер по месту прописки к врачу-дерматовенерологу. Где будет проведено дополнительное обследование, на основании результатов которого врач-дерматовенеролог сделает заключение.
  Ложноположительные результаты ИФА и РПГА чаще всего обусловлены:
  • Наличием в сыворотке пациента аутоантител (при системных заболеваниях соединительной ткани, например при системной красной волчанке), антител к другим возбудителям, схожим по антигенной структуре с бледной трепонемой (боррелии, сапрофитные трепонемы полости рта и гениталий).
  • Патологическими состояниями (онкологические заболевания, инфаркт миокарда).
  • Физиологическими состояниями (беременность)
  Референсные значения: отрицательно.

  1.3 Полимеразная цепная реакция

  Метод ПЦР применяется для качественного обнаружения ДНК бледной трепонемы (Treponema pallidum) в крови, моче и урогенитальных соскобах. Аналитическая чувствительность ПЦР составляет не менее 100 ДНК-копий в 5 мкл биоматериала. Специфичность теста составляет 98%.
  Полимеразная цепная реакция используется для диагностики
  • Врожденного сифилиса
  • Нейросифилиса
  Референсные значения: не обнаружено.

  Результаты анализов не являются диагнозом. Результаты лабораторных исследований интерпретирует врач – дерматовенеролог с учётом дополнительных анамнестических, лабораторных и инструментальных данных.

  «Лаборатория Диалайн» выполняет следующие тесты:
  • Антитела к бледной трепонеме (Treponema pallidum Сифилис) иммуноферментным методом (ИФА) в крови (КИ74)
  • Сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), качественное (КИ75)
  • Сифилис (кровь) методом ПЦР (МП67)
  • Сифилис (Treponema pallidum) (моча) методом ПЦР (МП66.4.)
  • ДНК (Treponema pallidum Сифилис) методом ПЦР качественное определение (МП66).

  Исследование крови на сифилис

  

  Сифилис – одно из самых распространенных венерических заболеваний, которое поражает внутренние органы, кожные покровы и центральную нервную систему. Существует возможность заражения сифилисом не только половым, но и бытовым путем: через посуду, постельное белье, предметы личной гигиены и другие вещи, которыми пользовались или к которым прикасались больные люди.

  Чтобы определить, больны вы или нет, необходимо обратиться к врачу, который проведет осмотр и выпишет направление на анализы. Лабораторная диагностика выявляет возбудителя сифилиса – бледную трепонему. Материалом для исследования может быть как плазма крови, так и отделяемое из кожных высыпаний, иногда образцы, полученные при пункции лимфатических узлов. Но все же основным видами лабораторной диагностики сифилиса являются серологические анализы, в частности, анализ крови на сифилис.

  Вы можете сдать кровь на определение возбудителя сифилиса несколькими методами (о выборе нужно советоваться с врачом):

  • Реакцией Вассермана;
  • Реакцией микропреципитации с кардиолипиновым антигеном — RPR;
  • Иммуноферментным анализом крови (ИФА);
  • Исследованием реакции иммунофлюоресценции (РИФ);
  • Реакцией иммобилизации бледных трепонем (РИБТ).
  • Анализом на реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА);

  Реакция Вассермана

  Определяет антилипидные антитела (реагины). К сыворотке крови пациента добавляют сифилитические антигены, образующие с реагинами иммунный комплекс, способный адсорбировать и связывать комплемент. Если такой комплекс образуется, то разрушение эритроцитов (гемолиз) не происходит, и они выпадают в осадок (положительная реакция). Если в сыворотке пациента нет реагинов, то происходит гемолиз, и эритроциты в осадок не выпадают (отрицательная реакция).

  RPR (Rapid Plasma Reagin)

  Или реакция микропреципитации с кардиолипиновым антигеном – это скрининговый метод диагностики сифилиса. Данная реакция в определенной степени может рассматриваться как более современная модификация реакции Вассермана. Основным показанием к проведению этого теста является первичное обследование на сифилис, медицинские осмотры, контроль эффективности лечения. Положительный результат требует проведения других, более точных тестов для подтверждения диагноза.

  Иммуноферментный анализ (ИФА)

  Один из самых перспективных методов лабораторной диагностики сифилиса. Его принцип – выявление специфического комплекса антиген-антитело, который образуется при соединении сифилитических антигенов, абсорбированных на твердом носителе, с антителами исследуемой сыворотки крови. В настоящее время наиболее распространенным является непрямой вариант ИФА, на заключительном этапе которого используются антитела к иммуноглобулинам человека, конъюгированные с пероксидазой хрена или другими ферментными маркерами. Измеряется окрашивание конечных продуктов этой реакции, которая зависит от количества связанных антител сыворотки.

  Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

  В ходе реакции иммунофлюоресценции (РИФ) определяется интенсивность свечения бледных трепонем в препарате, которая возникает только в присутствии антитрепонемных антител в сыворотке крови. Реакция проводится с сывороткой в разном разведении (в 10 и 200 раз).

  Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)

  Наиболее специфичный диагностический тест на сифилис. В сыворотке крови больных производится определение видеоспецифичных антител (иммобилизинов), которые обездвиживают бледные трепонемы в присутствии комплемента. С помощью микроскопа проводится подсчет доли утративших подвижность (иммобилизованных) бледных трепонем. Кровь методом РИБТ исследуют не ранее чем через 2 недели после окончания приема антибиотиков и других лекарственных средств.

  Исследование крови методами РИБТ и РИФ выполняют для диагностики скрытого сифилиса. РИФ (10-ти кратное разведение сыворотки) позволяет поставить диагноз даже у тех пациентов, в исследованиях которых бледная трепонема не обнаруживается.

  Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА)

  Соединение бледных трепонем сыворотки крови с обработанными специальными методами бараньими эритроцитами. При наличии в сыворотке крови возбудителя сифилиса происходит агглютинация (склеивание и последующее осаждение) эритроцитов. Реагенты вносят в лунки специальных пластин, о результате реакции судят по окрашиванию. Агглютинат эритроцитов имеет темно-красный цвет и форму пятна или кольца.

  Кровь на анализ нужно сдавать из вены, натощак (не менее 4 часов с последнего приема пищи). Не рекомендуется сдавать кровь после приема алкоголя, лекарственных препаратов, а также во время менструального цикла.

  Редакция благодарит сеть клиник «МедЦентрСервис» за помощь в подготовке материала.