Определение группы крови по системе АВО – особенность методики

Определение группы крови в системе АВО

Для предотвращения осложнений при переливании крови вследствие реакции агглютинации необходимо предварительно определять группу крови человека.

Цель работы: определить группы крови в системе АВО (с помощью цоликлонов).

Оснащение: цоликлоны, стерильный скарификатор, две стеклянные палочки, стандартные сыворотки групп I, II, III; кафельная белая плитка, вата, спирт, йод, эфир. Объект исследования — человек.

Проведение работы. Группы крови определяют по свойствам эритроцитов, которые устанавливают с помощью стандартных сывороток, содержащих известные агглютинины (антитела).

На кафельную плитку наносят, не смешивая, по одной капле стандартных сывороток I, II и III групп, содержащих соответственно следующие агглютинины: I-α и β, II-β и III – α. Затем, получив каплю крови из пальца, первой стеклянной палочкой переносят небольшое количество её в каплю сыворотки I группы, вторым чистым концом этой же палочки такое же количество крови переносят в сыворотку II группы. При помощи второй стеклянной палочки третью каплю исследуемой крови переносят в сыворотку III группы. Каждый раз кровь тщательно размешивают в капле сыворотки, пока смесь не станет равномерно розоватого цвета. Реакция агглютинации наступает через 1-5 мин. При наличии агглютинации капля утрачивает гомогенность и становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков. Группу крови устанавливают в зависимости от наличия или отсутствия агглютинации.

1. Если агглютинации нет во всех трёх каплях, это свидетельствует об отсутствии агглютиногенов в эритроцитах исследуемой крови и, следовательно, она принадлежит I (0) группе.

2. Если агглютинация произошла с сыворотками I и III групп, содержащими соответственно агглютинины α + β и α, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген А и эта кровь принадлежит II (А) группе.

3. Если агглютинация произошла с сыворотками I и II групп, содержащими агглютинины α + β и β, то эритроциты исследуемой крови содержат агглютиноген В и она принадлежит III (В) группе.

4. Если агглютинация произошла с сыворотками I, II и III групп, содержащими соответственно α + β, β и α агглютинины, то эритроциты исследуемой крови содержат как агглютиноген А, так и агглютиноген В. Следовательно, исследуемая кровь принадлежит IV (АВ) группе.

В последнее время определение групп крови человека системы АВО проводят с помощью цоликлонов Анти-А и Анти-В (антитела моноклональные Анти-А и Анти-В), которые применяют или взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками. Моноклональные Анти-А и Анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей-носителей анти-А и анти-В гибридом. Технология изготовления реагента исключает возможность его контаминации патогенными для человека вирусами.

Таблица 1. Оценка результатов определения групп крови с применением цоликлонов

Результаты реакции с цоликлоном Группа крови
Анти-А Анти-В
0 (1)
+ А (II)
+ В(III)
+ + АВ (IV)

Проведение работы. Нанесите на пластину индивидуальными пипетками цоликлоны Анти-А и Анти-В по одной большой капле. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови. Наблюдайте за ходом реакции с цоликлонами визуально при лёгком покачивании пластины в течение 3 минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек, но наблюдение следует вести 3 мин ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. Положительный результат выражается в агглютинации эритроцитов. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет.

Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) – отсутствие агглютинации.

Оформление протокола. Запишите, к какой группе крови принадлежит ваша кровь. Определите: реципиентам с какими группами крови можно переливать вашу кровь и кровь какой группы можно переливать вам?

Ситуационные задачи для определения конечного уровня знаний студентов:

При длительном голодании у людей появляются так называемые голодные отёки. В чём причина?

Человек съел недоброкачественную пищу. Через некоторое время у него обнаруживается повышение вязкости в крови. Чем можно объяснить это?

При исследовании крови обнаружено, что 80% гемоглобина составляет фетальный гемоглобин. Кому принадлежит кровь?

При подсчёте в больших квадратах камеры Горяева оказалось 580 эритроцитов. Сколько их содержится в 1мл крови, если кровь в меланжер набиралась до метки 0,5?

В 25 больших квадратах камеры Горяева оказалось 100 лейкоцитов. Сколько их содержится в 1мм 3 крови, если она набиралась в меланжер до метки 0,5?

В 1мм 3 крови содержится 6млн. эритроцитов. Сколько всего их в циркулирующей крови, если 20% всей крови находится в кровяном депо? Вес тела принять за 80кг.

В результате переливания несовместимой группы крови произойдет склеивание эритроцитов, что в дальнейшем приведет к гемолизу. Назовите вид гемолиза?

Почему женщинам запрещено работать на производстве с высоким уровнем вибрации, водить большегрузные машины и т.д.?

В чём причина увеличения билирубина в крови при отравлении уксусной кислотой?

Кровь отца резус-положительная, матери резус-отрицательная, первая беременность. Существует ли опасность резус-конфликта матери и плода, если плод имеет резус-положительную кровь?

Отец имеет резус-отрицательную кровь, мать – резус-положительную. У плода резус-фактора нет. Существует ли опасность резус-конфликта между плодом и матерью?

Почему при остром психическом стрессе может произойти инфаркт миокарда?

Свёртывание крови представляет собой сложный многокомпонентный «каскадный» ферментативный процесс. Нормальное протекание каждой предшествующей фазы обеспечивает развитие и завершение каждой последующей. Что происходит в первую, вторую и третью фазы коагуляционного гемостаза? Что включает послефаза гемокоагуляции?

Для нормального протекания свёртывания крови необходим ряд факторов: протромбин, тромбопластин, АС – глобулин, ионизированный кальций, проконвертин и др. Назовите фактор, участие которого необходимо для протекания всех фаз гемокоагуляции. Какой фактор обеспечивает превращение растворимого фибрин – полимера в нерастворимый фибрин? Где образуется протромбин? Какие факторы принимают участие в образование плазменной и тканевой протромбиназ?

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Студент – человек, постоянно откладывающий неизбежность. 10718 – | 7360 – или читать все.

188.163.64.82 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)

очень нужно

Методики определения групп крови по системе АВО.

Группа крови по системе АВО определяется наличием в эритроцитах двух антигенов, обозначаемых латинскими буквами А и В. Антиген А связывается агглютинином α, антиген В – агглютинином β. В крови человека не могут находиться реагирующие друг с другом (“одноименные”) агглютиногены и агглютинины (иначе происходила бы агглютинация эритроцитов). Таким образом, кровь 4-х групп имеет следующий состав:

№ группы и обозначение Агглютиногены эритроцитов Агглютинины плазмы
I (О) Нет α и β
II (А) А β
III (В) В α
IV (АВ) А и В Нет

Для определения группы крови по системе АВО используют стандартные сыворотки, полученные из донорской крови 4-х групп и содержащие агглютинины α и β в разных комбинациях. По одной капле стандартных сывороток каждой группы, не допуская их смешивания, помещают на белую керамическую пластинку. Используя 4 угла предметного стекла в каждую каплю сыворотки вносят небольшое количество исследуемой крови (соотношение объемов кровь/сыворотка=1/5-1/10). В течение 5 минут перемешивают кровь с сывороткой путем плавных покачиваний пластинки. В отсутствии агглютинации капля остается однородной и равномерно окрашенной. При агглютинации образуется прозрачная капля с зернышками агглютинированных эритроцитов. Группу крови определяют по тому, в каких сыворотках произошла агглютинация:

Из таблицы видно, что для определения группы крови, в принципе, достаточно сывороток II (β) и III (α) групп, которые соответственно выявляют наличие в эритроцитах исследуемой крови антигенов В и А. Полный набор сывороток используется для контроля.

Пример. При определении группы крови агглютинация наблюдалась только в сыворотках II (А) и III (В) групп, но не в сыворотке I (О) группы. Такого быть не должно, что свидетельствует о технической ошибке при определении группы крови. В этом случае исследование повторяют, используя новые сыворотки.

Определение резус фактора в крови человека.

Существует несколько методов определения Rh-фактора:

1. Метод конглютинации на чашках Петри. Для этого исследования, кроме глазных пипеток и флакона с изотоническим раствором хлорида натрия, необходимо иметь чашки Петри, водяную баню с постоянной температурой 46-48 0 С и стандартные антирезусные сыворотки всех групп системы АВО. Для анализа берут антирезусную сыворотку двух серий, одногруппную по системе АВО с исследуемыми эритроцитами:

· в чашку Петри наносят по 2 капли антирезусной сыворотки, слева – одной серии, справа – другой в 3 ряда для 3 исследований;

· в каждую серию прибавляют по капле эритроцитов (исследуемые, контрольные Rh-положительные и контрольные Rh-отрицательные);

· после перемешивания чашку Петри помещают в водяную баню на 10 минут, после чего рассматривают в проходящем свете. Наличие агглютинации свидетельствует о положительном результате, отсутствие ее – об отрицательном. Для контроля в этом методе используют заведомо Rh-отрицательные и Rh-положительные эритроциты.

2. Определение резус-принадлежности методом в пробирке без подогрева. Для этого метода используется стандартный универсальный реагент, представляющий собой сыворотку анти-D с неполными антителами, с добавлением 33% полиглюкина в качестве коллоидной среды:

· в сухие пробирки вносят одну каплю исследуемых эритроцитов и одну каплю универсального реагента анти-резус;

· содержимое перемешивают, медленно поворачивая пробирку так, чтобы оно растекалось по ее стенкам;

· через 3 минуты в пробирку добавляют 2-3 мл изотонического раствора NaCl и перемешивают содержимое 2-3-х кратным перевертыванием пробирки, не встряхивая;

· пробирку просматривают на свет. Результат определяется по наличию или отсутствию агглютинации. Если на фоне прозрачного физиологического раствора имеются агглютинаты в виде комочков или хлопьев из склеенных эритроцитов, то исследуемую кровь считают резус-положительной. При отсутствии агглютинации, равномерном окрашивании раствора исследуемую кровь считают резус-отрицательной.

3. Определение резус-принадлежности методом реакции агглютинации на плоскости с помощью цоликлонов (цоликлон – это солевой раствор моноклональных антител к антигенам, расположенным на поверхности эритроцитов человека) анти-D супер. Для этого используется специальный реагент, содержащий моноклональные антитела к резус-фактору (цоликлон анти-D супер или аналогичные):

· на пластинку или планшет наносят большую каплю (около 0,1 мл) реагента, а рядом маленькую каплю (0,02-0,03 мл) исследуемых эритроцитов;

· тщательно смешивают реагент с эритроцитами стеклянной палочкой;

· через 10-20 секунд начинают мягко покачивать пластинку. Несмотря на то, что четкая агглютинация наступает почти мгновенно, результаты реакции учитывают через 3 минуты после смешивания. При наличии агглютинации исследуемая кровь маркируется как резус-положительная, при отсутствии – как резус-отрицательная.

Дата добавления: 2018-08-06 ; просмотров: 369 ; ЗАКАЗАТЬ РАБОТУ

Плазменные антигены

Плазменные (сывороточные) антигены представляют собой определенные комплексы аминокислот или углеводов на поверх­ности молекул белков плазмы (сыворотки) крови.

ПОНЯТИЕ О ГРУППЕ КРОВИ

ГРУППА КРОВИ — это сочетание нормальных иммунологических и генетических признаков крови, кото­рое наследственно детерминировано и является биоло­гическим свойством каждого индивидуума.

Группы крови передаются по наследству, формируются на 3-4 меся­це внутриутробного развития и остаются неизменными в течение всей жизни. Считается, что у человека группа крови включает несколько де­сятков антигенов в различных сочетаниях. Этих сочетаний — групп крови — реально может быть несколько миллиардов. Практически они оди­наковы лишь у однояйцевых близнецов, имеющих один и тот же генотип.

В практической медицине термин «группа крови», как правило, отражает сочетание эритроцитарных антигенов системы АВО и резус-фактора и соответствующих антител в сыворотке крови.

Для каждого известного антигена обнаружены одно­именные антитела (анти-А, анти-В, анти-резус, анти-Келл и т. д.). Груп­повые антитела крови — не такое постоянное свойство организма челове­ка, как антигены. Лишь в групповой системе АВО антитела являются нормальным врожденным свойством плазмы крови. Эти антитела (агглю­тинины а и b) постоянно присутствуют в плазме крови человека.

Определение группы крови по системе аво

1. Группы крови по системе аво

Под термином «совместимость» понимают сочетание крови донора и реципиента по антигенам и антителам, не вызывающее иммунологи-ческих взаимодействий.

В зависимости от наличия в эритроцитах агглютиногенов А и В, а в сыворотке соответствующих им агглютининов а и b, все люди разделены на четыре группы:

• Группа О (I) — в эритроцитах агглютиногенов нет, в сыворотке агглютинины а и b.

• Группа А (II) — в эритроцитах агглютиноген А, в сыворотке агг­лютинин b.

• Группа В (III) — в эритроцитах агглютиноген В, в сыворотке агг­лютинин а.

• Группа АВ (IV) — в эритроцитах агглютиногены А и В, агглюти­нинов в сыворотке нет.

Антиген А не является однородным, существует два основных его подтипа: В соответствии с этим группа А (II) имеет две подгруппы А(П) и А2 (II), а группа АВ (IV) — АВ (IV) и А2В (IV).

Групповой антиген В отличается большей однородностью, хотя описаны редкие его варианты. Однако существенного кли­нического значения это не имеет.

Методика определения групп крови

Групповая принадлежность крови по системе АВО оп­ределяется с помощью реакции агглютинации. В настоящее время ис­пользуют три способа определения групп крови по системе АВО:

• по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам,

• по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стандар­тным эритроцитам (перекрестный способ),

• с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и аити-В).

При плановом исследовании врач стационара определяет группу кро­ви по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам или с помощью цоликлонов, после чего посылает кровь в серологическую лабораторию для проверки группы перекрестным методом.

Группа крови считается определенной только тогда, когда лаборато­рия подтвердила данные, полученные врачом стационара. Если резуль­таты исследований расходятся между собой, оба исследования нужно повторить.

В экстренном поряд­ке (при кровотечении необходимо срочное переливание крови), врач ста­ционара определяет группу сам (в лаборатории перепроверка произво­дится, но постфактум).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ ПО СТАНДАРТНЫМ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИМ СЫВОРОТКАМ

Наиболее распространен в клиничес­кой и лабораторной практике.

Суть метода сводится к обнаружению в испытуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сы­вороток. Проводят в помещении с хорошим освещением при темпера­туре 15-25°С.

а) Необходимое оснащение

• Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных серий. Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков гниения. Для удобства стандартные гемагглютинирующие сыворотки различ­ных групп подкрашивают в определенный цвет: О (I) — бесцвет­ная (серая), А (II) — синяя, В (III) — красная, АВ (IV) — ярко-желтая. Следует отметить, что указанные цвета сопутствуют всем этикеткам на препаратах крови, имеющих групповую принадлеж­ность (кровь, эритроцитная масса, плазма и др.).

• Белые фарфоровые или эмалированные тарелки или любые дру­гие пластинки со смачиваемой поверхностью, маркированные 0(1), А(П), В(Ш), AB(IV).

• Изотонический раствор хлорида натрия.

• Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предметные стекла).

б) Техника проведения реакции

1. На тарелку (пластинку) наносят стандартные изогемагглютииирующие сыворот­ки I, II, Ш групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля около 1 см в диаметре). Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп. Всего получается 6 капель.

2. Шесть ка­пель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку 0,01 мл (маленькая капля) последовательно переносят су­хой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови дол­жно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки), потом их осторожно с по­мощью стеклянных палочек с закругленными краями перемеши­вают.

3. После смешивания тарелку периодически покачивают.

Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд.

4. В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают ре­зультат реакции.

При положительной реакции обычно в течение первых 10-30 секунд в смеси появляются видимые невооруженным взглядом мелкие красные зернышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов.

Если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена — А и В и принадлежит к группе AB(IV). Однако в таких случаях для исключения неспецифической ре­акции агглютинации (холодовая агглютинация, пангглютинация, аллергия) необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB(IV), не содержащей агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0(1), A(II) и B(III), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ0 (IV).

Следует отметить, что при наличии в исследуемой крови слабого под­типа антигена А, реакция агглютинации с гемагглютинирующими сы­воротками групп 0(1) и В(Ш) начинается позже (на 3-4 минуте). Для точного определения подтипа антигена А необходимо проведение допол­нительной реакции с так называемым анти-А, реактивом.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ ПО СТАНДАРТНЫМ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИМ СЫВОРОТКАМ И СТАНДАРТНЫМ ЭРИТРОЦИТАМ (ПЕРЕКРЕСТНЫЙ СПОСОБ)

Способ наиболее часто используется в серологических лабораториях. Суть метода состоит в определении наличия или отсутствия в иссле­дуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изо-гемагглютинирующих сывороток, а также групповых антител а и b с по­мощью стандартных эритроцитов.

• Оснащение для реакции со стандартными эритроцитами отлича­ется тем, что для реакции агглютинации необходимы стандарт­ные эритроциты трех групп крови: 0(1), А(II), В(III).

• Стандартные эритроциты приготавливают из крови доноров с за­ранее известной группой крови, хранят при 4-8°С.

На маркированную тарелку пипеткой в шесть ячеек наносят по од­ной большой капле сыворотки исследуемой крови из пробирки (0,1мл), а рядом с ними — по одной маленькой капле (0,01мл) стан­дартных эритроцитов групп 0(1), А(П), В(Ш) (по две серии).

Особенностью трактовки результатов реакции со стандартными эрит­роцитами является то, что эритроциты группы 0(1) являются контрольны­ми (в них нет антигенов, что делает принципиально невозможной специ­фическую реакцию агглютинации с любой сывороткой).

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ МОНОКЛОНАЛЬНЫМИ АНТИТЕЛАМИ

Для определения группы крови используются моноклональные анти­тела, для получения которых применяется гибридомная биотехнология.

Гибридома — это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, син­тезирующим специфические моноклональные антитела. Гибридома при­обретает свойства обоих «родителей»: способность к неограниченному росту, характерную для опухолевой клетки, и возможность синтезиро­вать антитела, присущую иммунному лимфоциту.

Разработаны стандартные реагенты — моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, которые применяют для определе­ния агглютиногенов эритроцитов. Цоликлоны представляют из себя лиофилизированный порошок красного (анти-А) или синего (анти-В) цве­та, который разводят изотоническим раствором хлористого натрия непосредственно перед исследованием.

Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной боль­шой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой капле (0,01мл) исследуемой крови. После перемешивания составных частей за реакци­ей агглютинации наблюдают в течение 2-3 мин.

В 1940 г. К. Ландштейнер и А. С. Винер обнаружили в эритроцитах человека совершенно новый антиген, названный ими ре­зус-фактором (Rh). Резус-фактор присутствует в крови 85% людей, а 15% лиц этого фактора не содержат. Так он назван, по имени макаки Резус, у которой он всегда имеется.

Антигены резус относят к липопротеидам. Они являются очень актив­ными и способны вызывать образование иммунных антител.

Наличие резус-антигена выявляется у человеческого плода начиная с 5-8 недели и хорошо выражено у 3-4-месячного эмбриона.

Определение группы крови по системе АВО

Оснащение:

· Два комплекта стандартных сывороток 0(I), А(II), В(III) групп двух различных серий и одна ампула сыворотки АВ(IV).

· Набор пипеток для каждого группового флакона.

· Флакон с изотоническим раствором хлорида натрия с пипеткой.

· Стекла предметные или стеклянные палочки – 8 штук.

· Комплект «Резус» или кастрюля.

· Песочные часы на 3 мин. и 5 мин.

· Определение группы крови проводят в помещении с хорошим освещением и температурой от 15°С до 25°С. Сыворотки хранят в холодильнике при температуре от +4°С до +10°С.

3.2 Техника определения группы крови:

· Нанесите на тарелку в соответствующий сектор крупную каплю сыворотки двух серий I(O), II(A), III(B) групп.

· Затем последовательно внесите в капли сыворотки подготовленную исследуемую кровь уголком предметного стекла или стеклянной палочкой и тщательно перемешайте, капля вносимой крови должна быть в 5-10 раз меньше капли сыворотки.

· Затем путем покачивания тарелки тщательно перемешаете кровь с сывороткой.

· Предварительные результаты оцените через 3 мин., после чего добавляют каплю изотонического раствора хлорида натрия, вновь смешивают и через 5 мин.

· Проводят окончательную оценку реакции агглютинации (смешивание крови больного и стандартных сывороток).

· Реакцию агглютинации определяет врач.

· Результат реакции вносится в бланк направления или отмечается на лицевой стороне истории болезни, где ставится дата определения группы крови и личная подпись врача и медсестры, определявших группу крови.

· Далее исследуемая кровь отправляется в клиническую лабораторию для повторного определения группы крови (во избежание ошибки) и резус-фактора.

· По этой же системе определяется группа донорской крови из флакона и сверяется с записью на этом флаконе.

3.3 Оценка реакции агглютинации:

· Положительная хлопья и зернышки из склеившихся эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и перемешивания.

· Отрицательная – капли сыворотки на тарелке прозрачные, равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зерен.

Комбинации реакций агглютинации:

· Все три сыворотки в обеих сериях не дают агглютинации – исследуемая кровь 0(I) группы.

· Реакция агглютинации отрицательная с сывороткой А(II) группы обеих серий и положительная с сывороткой 0(I) и В(II) – исследуемая кровь А(II) группы.

· Реакция агглютинации отрицательная с сывороткой В(III) группы в обеих сериях и положительная с сывороткой 0(I) и A(II) групп – исследуемая кровь В(III) группы.

· Сыворотки 0(I), A(II), B(III) групп дают положительную реакцию в обеих сериях. Кровь принадлежит АВ(IV) группе. Прежде чем дать такое заключение, необходимо провести реакцию со стандартной сывороткой АВ(IV) группы по той же методике. Окончательная реакция агглютинации позволяет отнести исследуемую кровь к АВ(IV) группе.

3.4 Наиболее типичные ошибки при определении групповой принадлежности крови:

· Слабая активность стандартной сыворотки.

· Избыточное количество исследуемой крови, добавляемой к стандартной сыворотке.

· Замедленная реакция агглютинации при высокой температуре окружающей среды.

· Ложная агглютинация при подсыхании капли сыворотки и образование “монетных” столбиков эритроцитов или проявление холодовой агглютинации (температура окружающей среды ниже 15°С).

· Во всех сомнительных случаях проводят повторное исследование групповой принадлежности со стандартными сыворотками других серий.

· Добавление капли изотонического раствора хлорида натрия к исследуемой крови и сыворотке, а также проведение исследований при температуре выше 15°С позволяют избежать указанных ошибок.

· Групповая принадлежность крови больного, независимо от ранее определенной принадлежности, определяется каждый раз при переливании крови и ее компонентов.

· Отмечать групповую принадлежность на основании отметки в паспорте, выписки из истории болезни или других справок НЕ РАЗРЕШАЕТСЯ.

3.5 Правила хранения групповых стандартных сывороток:

· Срок годности групповых сывороток определяется на этикетке флаконов и предусмотрен БРСПК НИИПК при хранении в холодильнике (t +4°С).

· С момента вскрытия флаконы групповых сывороток можно использовать в течение 10 дней при хранении в холодильнике (t +4°). При появлении во флаконах групповых сывороток хлопьев и наличия мути, сыворотки необходимо заменить.

3.6 Проба на групповую совместимость:

· Выполняется с сывороткой больного.

· На белую пластинку нанести 2-3 капли сыворотки больного.

· Добавить каплю крови донора в 5 раз меньшую.

· Кровь перемешать, периодически покачивая, в течение 5 мин., одновременно наблюдая результат реакции.

· Отсутствие агглютинации эритроцитов донора свидетельствует о совместимости крови донора и реципиента в отношении групп крови АВО.

· Появление агглютинации указывает на их несовместимость и на недопустимость переливания данной крови.

· Если больному переливается кровь из нескольких флаконов, проба на совместимость должна быть сделана с кровь из каждого флакона, даже если кровь получена от одного донора.

3.7 Проба на индивидуальную совместимость (резус-совместимость):

· В чашку Петри вносят 2 капли сыворотки больного и малую (0,1 мл) каплю крови из флакона (кровь донора).

· Чашку Петри ставят на водяную баню – комплект “Резус” при температуре воды 46-48°С на 10 минут.

· Если реакция агглютинации нет, то кровь индивидуально совместима и можно приступать к биологической пробе на совместимость.

3.8 Биологическая проба:

· Выполняется путем внутривенного струйного введения в три этапа с интервалом в 3 минуты крови в зависимости от возраста от 2 мл до 15 мл (по назначению врача). Скорость переливания – 5 минут. В процессе наблюдается состояние больного.

· Если после струйного введения крови нет признаков несовместимости (беспокойство, затрудненность дыхания, чувство сдавления, боли в пояснице и животе, озноб, учащение пульса и дыхания, снижения АД), то еще дважды проводят подобную пробу и затем выполняют трансфузию до конца.

· Выполнение всех указанных проб проводится под обязательным наблюдением врача.

Переливаемая кровь, препараты крови выдерживаются при комнатной температуре 30 – 40 минут, а в экстренных случаях подогреваются до температуры +37° С на водяной бане под контролем термометра. Переливание крови и ее компонентов проводится под наблюдением врача. Оставшуюся во флаконе кровь – около 20 мл, не нарушая антисептики, помещают в холодильник, где она хранится при температуре +4° в течение 48 часов. При появлении у больного реакции или осложнений эта кровь может быть использована для выяснения причины их возникновения (посев крови, определение групповой или резус-принадлежности, проверка пробы на совместимость перелитой крови с кровь больного).

3.9 Правила и сроки хранения крови и ее препаратов:

· Все препараты крови хранятся в холодильнике при температуре от +4° до +6°С в вертикальном положении.

· Отстоявшаяся кровь должна иметь четкую слоистость: первый (верхний) слой золотисто-желтого цвета – плазма крови – должен быть прозрачным; второй слой сероватого цвета – гомогенный, тонкий – слой лейкоцитов; третий слой равномерного темно-красного цвета – слой эритроцитов.

· Целесообразно кровь использовать для переливания в течение 10 дней с момента заготовки; максимальный срок хранения 21 день.

· При появлении хлопьев, сгустков, розового прокрашивания плазмы, а так же по истечении срока хранения кровь не годна к переливанию.

· Эритроцитарная масса хранится от 7 до 23 дней в зависимости от консерванта.

· Лейкоцитарная масса хранится 48 часов.

· Сухая плазма хранится при комнатной температуре +20° С до 5 лет.

· Свежезамороженная плазма (СЗП) хранится в морозильнике до 6 месяцев.

3.10 Регистрация переливания крови и ее препаратов:

· После завершения переливания крови в специальном журнале для регистрации переливаний делается запись с указанием дозы перелитой крови, ее паспортных данных, результатов проб на совместимость, наличие или отсутствие осложнения.

· В историю болезни пациента вклеивается протокол гемотрансфузии, где указаны вышеперечисленные пункты по перелитой крови и ее компонентов за подписью врача, ответственного за переливание крови.

3.11 Наблюдение за больным после гемотрансфузии:

· После переливания крови и ее компонентов больному необходим постельный режим в течение 3-4 часов.

· Наблюдение за больным осуществляется в течении суток: оценка общего состояния, поведения, жалоб, внешнего вида, состояния кожного покрова, мочеотделения.

· Ежечасно в течение 3 часов больному проводят термометрию, подсчитывают пульс, измеряют АД.

· На следующий день делают общий анализ крови и мочи.

· Если в течение 3 часов после трансфузии при ежечасной термометрии температура тела не повышалась, то можно считать, что реакции на переливание крови не было.

| следующая лекция ==>
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ГРУПП КРОВИ ПО СИСТЕМЕ АВО ПРИ ПЕРЕЛИВАНИИ КРОВИ И ЕЕ КОМПОНЕНТОВ | Методика искусственной вентиляции легких

Дата добавления: 2013-12-14 ; Просмотров: 902 ; Нарушение авторских прав? ;

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

Определение группы крови по системе АВО – особенность методики

Методика определения группы крови по системе АВО

Для проведения исследования необходимы стандартные гемагглютинирующие сыворотки I (О), II (А), III (В), IV (АВ), причем первые три варианта сыворотки должны быть представлены двумя сериями.
Сыворотка должна быть пригодной для использования, для этого обязательно проверяют соответствие ее сроку годности, указанному на этикетке сыворотки, определяют визуально ее состояние. Нельзя использовать сыворотку, если она является мутной, содержит посторонние примеси, хлопья, взвесь, изменила цвет.
Сыворотка считается пригодной для использования, если она является прозрачной, ампула имеет этикетку, на которой указаны основные ее свойства (серия, срок годности, групповая принадлежность, цветная маркировка соответственно групповой принадлежности), ампула не повреждена, не вскрыта.
Необходимы чистая тарелка, которую необходимо разделить на четыре части, отметив соответствие каждой определенной группе крови, игла-скарификатор, стерильные ватные тампоны, чистое сухое обезжиренное предметное стекло, спирт. На тарелку в соответствии с маркировкой наносят по капле каждой сыворотки. Затем кожу подушечки четвертого пальца левой руки обрабатывают стерильным ватным тампоном со спиртом. С помощью скарификатора прокалывают кожу, удаляя первую выступившую каплю крови (примесь к ней спирта и тканевой жидкости может исказить результаты исследования). Следующую каплю крови забирают уголком предметного стекла, для каждой капли сыворотки – чистым уголком стекла.
Для исследования к капле гемагглютинирующей сыворотки добавляют каплю крови в соотношении 10: 1. Затем, аккуратно поворачивая и покачивая тарелку, производят перемешивание крови. Агглютинация обычно выявляется в виде выпадения хлопьев, которые хорошо визуализируются. Для уточнения результата к капле добавляют изотонический раствор хлорида натрия, после чего с достаточной достоверностью оценивают результат.
Одним из обязательных условий проведения исследования является соблюдение температурного режима.
Если гемагглютинация происходит в капле с сыворотками I (О), III (В), но не происходит с сывороткой II
(A), причем результат аналогичен с сыворотками двух сывороток, это означает, что исследуемая кровь принадлежит III (B) группе по системе АВО.
Если гемагглютинация происходит в капле с сыворотками I (О), II (А), но не происходит с сывороткой III
(B), это означает, что исследуемая кровь принадлежит II (А) группе по системе АВО.
Но возможна и такая ситуация, когда гемагглютина-ция не происходит ни с одной из исследуемых сывороток, причем обеих серий. Это означает, что исследуемая кровь не содержит агглютиногенов и принадлежит к I (О) группе по системе АВО.
Если же агглютинация происходит со всеми сыворотками, причем обеих серий, это означает, что исследуемая сыворотка содержит оба агглютиногена (А и В) и принадлежит к IV (АВ) группе по системе АВО.

Как определить группу крови человека по системе АВО, суть метода и его важность

Кровь человека – уникальная жидкость, объединяющая практически весь животный мир. Ее характеризуют и подразделяют по группам и резус-фактору. Как происходит определение группы крови по системе АВО? Каков алгоритм определения группы крови? Какой аппарат для этого применяется, и что требуется для проведения данной процедуры?

Особенности классификации

Чтобы понять, как определяются группы, важно разобраться, что такое наследование групп крови по системе АВО, и чем отличаются виды крови на молекулярном уровне.

На тип кровеносной жидкости не влияет:

Групповые параметры крови не изменяется с течением времени и остается постоянной в течение всей жизни.

Люди с разными типами крови могут совершенно не отличаться друг от друга

Группы крови отличаются содержанием разных агглютиногенов – элементов, расположенных на эритроцитарных клетках и агглютининов, которые присутствуют в плазме. У представителей одной группы присутствует один тип агглютиногена, у другой – других. В некоторых типах крови таких компонентов нет вообще.

Агглютиногены бывают двух типов:

Ниже представлена таблица, описывающая их содержание в зависимости от группы:

  • первая группа – агглютиногенов нет;
  • вторая группа содержит агглютиногены А;
  • третья группа – агглютиногены В;
  • четвертая группа – агглютиногены А и В одновременно.

Учитывать группу крови и резус фактор жизненно необходимо при беременности, особенно, когда женщина резус-положительная, а мужчина – резус-отрицательный. В данном случае возникает иммунологическая несовместимость матери и плода, в результате чего последний отторгается.

Материнский организм реагирует на него, как на чужеродное явление. В результате ребенок погибает, рождается недоношенным или получает гемолитическую болезнь новорожденных – состояние, требующее длительного и сложного лечения. Такое явление происходит, если ребенок унаследовал положительный резус-фактор от отца, а мать резус-отрицательна. Однако при первой беременности изоиммунизация происходит далеко не всегда, поскольку антитела не успевают выработаться.

Еще этот фактор учитывают те, кто соглашается на переливание донорский крови. Иногда данную процедуру рекомендуют тем, кто перенес тяжелое кровотечение, например, при поражении крупной артерии, открытом переломе, тяжелых формах туберкулеза.

Знать свою группу и резус важно беременным женщинам

Донором называют того, кто сдает кровь для переливания ее другому человеку. Того, кто принимает этот биоматериал, называют реципиентом. Кровь с одинаковыми параметрами считается подходящей для донорства.

Почему нельзя ошибиться при исследовании

Нет механизма совмещения разных групп. Когда жидкости разных категорий смешиваются, происходит агглютинация, то есть процесс склеивания клеток между собой. Практически в 100% случаев результатом становится смерть пациента. В процессе агглютинации кровь слипается в комочки разных размеров. Циркуляция такой жидкости приводит к летальному исходу.

Люди с первой группой неспособны принимать иную кровь, кроме такой же. В ее составе нет никаких агглютиногенов, поэтому попадание этих веществ приводит к плаченым последствиям.

Агглютинация не происходит, когда к четвертой категории попадает кровь любого типа. В ней содержатся агглютиногены как А, так и В. Человек с четвертой группой крови считается идеальным реципиентом.

Почему важно точно определять резус-фактор

Однако важно не только определение группы крови по системе АВ0, но и выявление резус-фактора. Что это такое?

Резус-фактор – это генетическая особенность, не зависящая от человека. Тип крови закладывается еще при зачатии, он подразделяется на резус-положительный и резус-отрицательный. При развитии резус-конфликта организм матери вырабатывает антитела к биоматериалу ребенка, и происходит отторжение плода.

Подробнее о том, как наследуются типы кровеносной жидкости и резус-фактор, можно узнать, просмотрев видеосюжет:

Важно! Если при беременности возникнет резус-конфликт, это может закончиться летально для ребенка и вызвать осложнения в здоровье женщины.

Неважно, одноплодная беременность, или внутри женщины развиваются монозиготные близнецы. Процесс, вызванный резус-конфликтом, всегда приводит к печальным последствиям.

Определение группы крови по системе АВО важно проводить на ранних сроках беременности. Еще процедура показана тем, кто рискнул проводить переливание крови.

Процедура переливания крови, несовместимой по резус-фактору, приводит к гемолизу. В организме начинается распад эритроцитов. По сути, это иммунный ответ на проникновение в организм чужеродных клеток.

Выделяется гемолизин, то есть вещество, провоцирующее это разрушение. В итоге развивается тяжелая анемия. Если состояние вызвано переливанием, чаще всего процесс заканчивается летально.

Гемолиз – процесс разрушения эритроцитов антителами

Определение групп с помощью цоликлонов

Принцип определения группы крови цоликлонами заключается в несложной процедуре с использованием специальных реагентов. Антигенный и агглютининовый процесс достаточно яркий, чтобы сразу получить достоверную исчерпывающую информацию.

Важен порядок проведения данной манипуляции. Определение группы крови по системе АВ0 выполняется исключительно в лабораторных условиях. Для сохранения качества реагентов и самого биоматериала требуется охлаждение, которого невозможно достичь в домашних условиях.

Методика определения группы крови по системе АВО с помощью цоликлонов – пример современного способа диагностики и основа для будущих исследований и открытий. Процедуру можно проводить женщинам, ожидающим ребенка, независимо от того, какая неделя беременности протекает на данный момент.

Подготовка к манипуляциям

Как происходит наследование групп крови системы АВО, можно понять, если провести детальное изучение передачи физиологических признаков. Чтобы полученная характеристика крови была точной, требуется четко соблюдать все правила ее проведения. Обычно на такие манипуляции направляет врач-генетик. Исследование представляет собой анализ инвитро. Расшифровка необходима, ее тоже проводит врач.

Чтобы ни физиология, ни наследственность, ни стресс не сказались на результатах лабораторного исследования, важно четко соблюдать правила, как сдать такой анализа и условия, при которых он должен проводиться.

Чтобы правильно определить естественный генотип, важно соблюсти следующие условия:

  • в кабинете, где проводятся операции с реагентом, должна быть постоянная температура в диапазоне от 15-25 градусов;
  • все компоненты, используемые для определения системы групп крови, должны храниться в плотно закрытых банках;
  • чтобы стандартный метод исследования дал ясный результат, кабинет лаборатории должен быть хорошо освещен;
  • сыворотка и другие компоненты, используемые при процедуре, не должны содержать каких-то комков, или быть мутными.

Условия проведения процедуры могут быть соблюдены только в мед-учреждении. Требуется заранее подготовить инструменты, которые потребуются для определения типа в системе крови АВО:

  • специальные предметные стекла;
  • цоликлоны двух видов;
  • две разные пипетки;
  • стеклянные палочки для перемешивания реагентов;
  • шприц для манипуляций с кровью пациента;
  • вата;
  • стерильные салфетки;
  • спиртовой раствор;
  • жгут для манипуляций на венозных сосудах.

К проведению лабораторного исследования важно качественно подготовиться

После того как все материалы и инструменты подготовлены к проведению процедуры, к ней можно приступить.

Проведение процедуры

Пациент, которому назначено переливание, или беременная женщина сдает кровь. Для этого забирают примерно 5 мл биоматериала. Такова норма для достоверного определения группы.

После этого на планшетку или специальную тарелку наносят по капле материала и по капле каждого реагента. Один реагент способен к агглютинации с антигенами, содержащимися во второй группе, а другой – к тем, что в третьей.

С помощью стеклянной палочки выполняется смешивание капли биоматериала с каждым реагентом в отдельности. Тот реагент, с которым произойдет агглютинация, и есть определитель группы крови. Этот нюанс имеет главное значение.

Такой множественный анализ расшифровывается так:

  • агглютинация реагента А – вторая группа;
  • агглютинация реагента В – третья группа;
  • агглютинация не произошла – первая группа;
  • агглютинация произошла с обоими реагентами – четвертая группа.

Наглядно о проведении такого исследования в лаборатории рассказывается в видео:

Внимательный подход врача позволит точно определить группу и резус-фактор, что может сыграть важнейшую роль при планировании и вынашивании беременности. Так можно сохранить человеку жизнь и хорошее самочувствие, а некоторым парам подарить возможность иметь детей.

Методики определения групп крови, описание таблицы

Практически каждый человек хотя бы единожды за свою жизнь проходил тест для установления принадлежности группы крови. О методах проведения данного анализа и об их достоверности пойдет речь далее.

Для чего проводится диагностика?

Группа крови – это определенный ряд антигенов, размещенных на поверхности эритроцитов, которые и определяют их специфичность. Таких антигенов известно очень много, поэтому принято единую классификацию крови по АВО и резус-фактору.

Этот показатель в обязательном порядке определяется у пациентов перед хирургической операцией, военным, полицейским и другим категориям людей, которые могут потребовать срочного переливания крови.

Стандартная методика определения группы крови

Самый распространенный метод исследования данного показателя – это способ с применением стандартной сыворотки. Эта диагностика определяет общепринятые антигены по системе АВО.

Изогеммагглютинирующая сыворотка представляет собой совокупность специальных антител к наружным частичкам эритроцитов. Если находится совместимый антиген, на который могут воздействовать антитела, то формируется комплекс, способствующий началу иммунно-защитного механизма. Вследствие этого происходит склеивание эритроцитарных клеток крови (агглютинация). Если подобное происходит, то делается вывод о несовместимости крови.

Данные сыворотки изготавливаются из крови доноров по специальной системе, подразумевающая под собой извлечение плазмы, в которой и содержать антитела, после чего ее разводят изотоником – хлорид натрия, это проходит в несколько этапов:

  • В емкость наливают 1 мл воды, в которой растворено 0,9% обычной соли.
  • В эту же пробирку вносят такое же количество разведенной плазмы.
  • Затем 1 мл данной жидкости вносят в емкость с изотоником.

Процесс позволяет получить соотношение 1:256. Если методика разведения будет нарушена, то есть большая вероятность получения ошибочных результатов.

Проведение исследования

На поверхность планшета наносится 0,1 мл каждой сыворотки в район, где нанесена нужная пометка. За тем берется исследуемая кровь объемом 0,01 мл для каждого образца. И затем проводится смешивание каждой капли сыворотки с кровью.

Спустя пять минут проводят диагностику. Тестирование считается положительным, если прошла реакция агглютинации. Исходя из результатов анализов, выполняется построение таблицы, в которую они и заносятся.

Таблица результатов теста на группу крови с применением стандартных сывороток.

Методика перекрестных реакций

В этом случае, чтобы определить агглютиноген используют цоликлоны. Иначе стандартные сыворотки с технологией параллельного выяснения благодаря эталонным эритроцитарным клеткам.

Два этих способа весьма сходны между собой. Но различия все, же есть.

На поверхность, на которую предварительно помещаются различные сыворотки, наносят по небольшой капле обычных эритроцитов. Затем кровь разделяют на фракции при помощи центрифуги. И форменные элементы добавляют к стандартным сывороткам, а плазменную часть – к стандартным эритроцитарным клеткам. Оценивание результатов проводят через пять минут и показатели отмечают в таблице.

Благодаря данной методике исключаются ошибки при исследовании.

Метод с использованием цоликлонов

Если нет возможности определить группу крови стандартными сыворотками, то используют данную методику.

Цоликлоны – гибридные антитела, которые получают из в-лимфоцитов крови мышей.

Последовательность проведения диагностики такая:

  1. После нанесения отметок на планшет, которые соответствуют виду цоликлона, наносится раствор.
  2. К каждому образцу цоликлона вносят одну каплю диагностированной крови.
  3. Оценка результатов через пять минут.
  4. Для данной методики необходимо соблюдать специальные условия. Они включают в себя пригодность цоликлонов, температуру в помещении и уровень влажности.

Результаты анализов считаются позитивными в том случае, когда при смешивании данных фракций наблюдается реакция агглютинации. Если подобное произошло в двух образцах, то считается, что кровь относится к четвертой группе. Если реакция не наблюдается вовсе, то к первой. Диагностические ошибки в данной методике встречаются не часто.

Быстрый способ «Эритротест»

Выше перечисленные способы используются в медицине уже долгое время и распространены по всему миру. Но ввиду того, что отрасль постоянно развивается, вводятся быстрые диагностические методы по установлению принадлежности к группе крови. Таким нововведением считается и «Эритротест».

Чтобы определить показатель данным способом необходимо иметь следующее оборудование:

  • Стандартный планшет с пятью лунками
  • Скарификатор для прокола и получения биологической жидкости
  • Стеклянная пипетка с резиновой грушей
  • Пипетка для забора реактивов
  • Палочки для смешивания компонентов

Основное преимущество эритротеста состоит в том, что исследование не требует дополнительных условий и доступно в тот момент, когда проведение стандартной диагностики невозможно.
Последовательность проведения
В углублениях планшета размещают цоликлоны к антигенам поверхностного типа и основному, который отвечает за наследственную передачу резус-фактора. В последнюю лунку добавляют контрольную сыворотку, которая исключит ошибочный результат и верно укажет на принадлежность к той или иной группе.

Оценивание результатов анализа проводится с помощью таблицы, в ней указываются возможные результаты тестирования.

Классификация по системе АВО

Группа крови, определение ее проводится исходя из специально разработанных норм. Существует определенная таблица, которая характеризует каждую группу крови.

Группы Описание
I (0) Эритроцитарные антигенные качества не наблюдаются
II (А) Присутствие антигена А
III (В) Наличие на поверхности эритроцитарных клеток антигена В
IV (АВ) Присутствие обоих антигенов

Видео: Методы определения групп крови:

Ссылка на основную публикацию