Осмотическая резистентность эритроцитов — понятие, метод определения показателей

Осмотическая резистентность эритроцитов

Красные кровяные тельца (или эритроциты) — наиболее многочисленные клетки крови. Особое устройство мембраны позволяет им захватывать молекулы кислорода в капиллярах легких и транспортировать его к тканям и органам. Однако при определенных патологиях структура оболочки эритроцитов становится менее устойчивой и легко разрушается. Такие изменения приводят к значительному уменьшению количества красных телец в крови и последующему нарушению кислородного обмена в тканях организма.

Способность мембран красных клеток крови противостоять разрушению под воздействием неблагоприятных факторов получила название резистентность. Особое значение при диагностике заболеваний имеет осмотическая резистентность (ОРЭ) — сохранение устойчивости оболочки клетки в условиях изменения концентрации растворенных солей в окружающей ее среде.

Методика измерения осмотической резистентности

Клетки крови способны нормально функционировать в изотоническом растворе (содержание ионов NaCl не превышает 0,85%). Такая концентрация NaCl соответствует количеству ионов соли в сыворотке крови. Те растворы, которые содержат большее количество солей, называются гипертоническими, а меньшее — гипотонические. Мембраны клеток, помещенных в такие растворы, быстро разрушаются.

Эритроциты здорового человека способны выдерживать изменения осмотического давления, то есть обладать прочной оболочкой. Для определения стойкости мембран клеток крови используют следующую методику:

1. В пробирки помещается раствор NaCl c разной степенью концентрации (начиная от самой большой — 0,7%, до наименьшей — 0,22%);
2. В каждую пробирку добавляется небольшое количество крови (не более 0,02 мл);
3. В течение следующего часа пробирки держат при температуре в 22-23°C;
4. Полученные растворы центрифугируют и по цвету содержимого высчитывают примерное время начала разрушения клеток крови и момент их полного гемолиза;

Чуть розовый раствор свидетельствует о том, что эритроциты только начали разрушаться, тогда как ярко-красный цвет — знак того, что произошел полный распад клеток.

При помощи этого анализа определяют минимальную и максимальную осмотическую резистентность кровяных телец. Максимальная соответствует тому значению содержания NaCl, при котором происходит полное разрушение клеток крови. Минимальная же определяется тем количеством, при котором клетки разрушаются меньше всего.

Подготовка к процедуре. Нормальные значения резистентности.

Расчет значений осмотической резистентности позволит определить причину нехватки эритроцитов в крови пациента. Для проведения анализа кровь берется из вены и сразу же помещается в пробирку с антикоагулянтом, чтобы избежать ее свертывания. В каких-либо особых приготовлениях перед сдачей анализа нет необходимости — пациент может не менять привычный ему режим питания.

Для взрослого человека нормальными показателями являются следующие значения:

• минимальная резистентность — не выше 0,48%;
• максимальная — не ниже 0,32%

Следует помнить, что у маленьких детей показатели устойчивости значительно выше, чем у взрослых пациентов, в то время как у пожилых — немного ниже нормы.

Существует несколько факторов, которые могут повлиять на достоверность данных анализа:

• недавнее переливание крови;
• присутствие во взятом образце патогенных микроорганизмов, которые вызывают гемолиз клеток;
• некоторые заболевания, при которых количество зрелых эритроцитов в крови минимально (тяжелые формы анемии);
• наконец, человеческий фактор — неосторожное обращение с наполненными пробирками может привезти к преждевременному гемолизу;

Если вышеперечисленные причины отсутствовали, а результат анализа выходит за пределы нормы, то можно говорить о серьезном заболевании, за которым последуют значительные нарушения обмена веществ в организме.

Отклонения от стандартных показателей

ОРЭ менее 0,33% развивается в следующих ситуациях:

• значительные кровопотери;
• при талассемии (наследуемое заболевание, при котором нарушен синтез белков, входящих в состав гемоглобина);
• при спленэктомии (удалении части селезенки — органа, активно участвующем в процессах кроветворения);
• при полицитемии (нарушение функций кроветворных клеток костного мозга);

Резистентность более 0,48% связана с такими заболеваниями как:

• наследственная гемолитическая анемия (передающаяся по наследству патология, при которой организм активно разрушает свои же клетки крови);
• гемолитическая анемия новорожденных (диагностируется в течение первых дней жизни младенца. Может быть как наследственной, так и приобретенной);
• отравление солями тяжелых металлов;

Как правило, отклонения от нормальных показателей резистентности сигнализируют о сбоях в работе организма, причем чаще всего диагностируемые патологии носят наследственный характер.

Предотвращение снижения ОРЭ

Как правило, причиной снижения резистентности клеток становятся наследственные заболевания. Пациенты, столкнувшиеся с такой проблемой, могут обратиться к генетику, чтобы рассчитать возможность появления такого же заболевания у их детей. В остальных случаях профилактика снижения плотности мембраны клеток крови сводится к ведению здорового образа жизни, отсутствию вредных привычек, созданию наиболее благоприятных условий для процесса кроветворения.

Признаки снижения резистентности клеток крови

Еще до проведения анализа, пациент может найти у себя признаки снижения устойчивости мембран кровяных телец. Вот основные проявления подобного отклонения:

• Сонливость;
• Угнетенное состояние;
• Значительное снижение массы тела;
• Анемичность слизистых оболочек;
• Повышенная температура тела;
• Отсутствие интереса к еде;

Перечисленные симптомы должны стать серьезным поводом для беспокойства. При их обнаружении следует немедленно записаться на прием к врачу и пройти полное обследование. Чем раньше будет поставлен диагноз, тем быстрее можно будет начать лечение и тем меньший вред будет нанесен организму.

Зависимость устойчивости мембраны от формы кровяных телец и их возрастных изменений

Плотность мембраны зависит не только от возраста клеток, но и от их формы. Сформировавшийся эритроцит приобретает вид двояковогнутого диска, однако также могут встречаться и дегенеративные формы эритроцитов: сферические, звездчатые, полулунные, серповидные и т.д. Для разных заболеваний характерны свои изменения клеток крови. К примеру, при серповидно-клеточной анемии развиваются серповидные эритроциты, талассемия характеризуется появлением овальных клеток, большинство видов анемий проявляют себя появлением сфероцитов — эритроцитов сферической формы.

Нормальную устойчивость мембраны имеют лишь эритроциты в форме двояковогнутого диска. Красные клетки крови другой конфигурации менее жизнеспособны — их резистентность составляет 0,4-0,6% при обычных показателях в 0,32-0,48%. Кроме того, такие клетки, как правило, не способны качественно выполнять свои функции. Из патологических форм чаще всего встречаются овальные эритроциты. Такие клетки можно наблюдать не только при болезнях крови, но и у полностью здоровых людей, поскольку, чем старше становятся эритроциты, тем более округлыми они становятся.

Таким образом, наиболее устойчивыми клетками являются молодые, недавно сформировавшиеся эритроциты, отличающиеся наиболее выраженной дисковидной формой.

Методика расчета осмотической устойчивости нередко применяется при обнаружении гемоглобинопатии и прочих заболеваний крови и отличается эффективностью и простотой. Наиболее часто его применяют для обнаружения гемолитической анемии и онкогематологии (в том числе и у новорожденных).

Осмотическая резистентность эритроцитов

Осмотическая резистентность эритроцитов — показатель устойчивости эритроцитов к осмотическому давлению. Стойкость ККТ определяется только путем диагностических мероприятий. Превышение или понижение нормы будет свидетельствовать о развитии определенного патологического процесса, а потому показатель следует всегда контролировать.

Осмотическая резистентность эритроцитов имеет свои минимальные и максимальные значения:

• максимум — воздействие гипотонического раствора натрия хлорида, когда в течение трех часов происходит гемолиз совершенно всех клеток;
• минимум — воздействие вещества другой концентрации, при которой происходит разрушение только минимально устойчивых клеток.

Следует отметить, что осмотическая резистентность эритроцитов будет зависеть от их возраста. Самая большая устойчивость у молодых ККТ как у самых плоских.

Определение

Определение осмотической резистентности эритроцитов осуществляется следующим образом:

• используется несколько стеклянных пробирок, в которые заливается раствор натрий хлорида разной концентрации — чаще всего от 0,7 до 22 %;
• в пробирки с раствором добавляют образцы крови, но только в одинаковом количестве;
• образцы помещают в условия комнатной температуры на 60 минут;
• по истечении срока пробирки с образцами центрифугируют;
• полученный после этого окрас жидкости будет указывать на показатели осмотической стойкости эритроцитов.

Если окрас жидкости розовый, это говорит о минимальной концентрации, а вот ярко-красный цвет будет говорить о максимальной. Норма для сферической резистентности эритроцита составляет 0,32–0,44 процента раствора натрия хлорида.

Норма

Норма для взрослого человека следующая:

• максимальная устойчивость — норма 0,32–0,34 %;
• минимальная осмотическая резистентность эритроцитов — 0,46–0,48 %.

Если норма не соблюдается, то есть показатели выше или ниже, это может свидетельствовать о развитии определенного патологического процесса в организме. Даже незначительное отклонение от нормы может указывать на довольно тяжелые патологические процессы в организме, поэтому осмотическое давление нужно обязательно контролировать.

Причины отклонения от нормы

Норма показателей может нарушаться вследствие определенных заболеваний как острого, так и хронического типа. Максимальные показатели резистентности могут наблюдаться в следующих случаях:

• атеросклероз;
• злокачественные новообразования в желудочно-кишечном тракте;
• талассемия;
• полицитемия, но только в некоторых случаях;
• спленэктомия;
• гемоглобинопатия;
• гемоглобиноз;
• застойная желтуха;
• врожденные заболевания крови;
• системные и аутоиммунные патологии.

Минимальная осмотическая резистентность может быть следствием таких патологических процессов:

• железодефицитная анемия;
• гемолитическая анемия у новорожденных;
• отравление тяжелыми металлами;
• обширная интоксикация организма;
• наследственная форма гемолитической анемии.

Небольшое отклонение от нормы может быть обусловлено такими заболеваниями:

Предрасполагающие факторы для снижения устойчивости ККТ:

• выработка шарообразных эритроцитов — генетическое отклонение;
• завершение жизненного цикла ККТ, что приводит к шарообразной форме;
• сердечно-сосудистые заболевания.

Определить, что именно привело к такому нарушению, можно только путем диагностических мероприятий. Поводом для начала обследования будет соответствующая клиническая картина.

Симптоматика

Клиническая картина будет носить общий характер. Специфических симптомов, которые будут характерны только отклонению от нормы резистентности ККТ, нет.

Может присутствовать симптоматика такого характера:

• бледность кожных покровов;
• снижение веса без видимой причины;
• повышенная утомляемость и нарастающая слабость, что будет больше похоже на синдром хронической усталости;
• плохой аппетит;
• сонливость;
• обострение хронических заболеваний.

При наличии клинической картины нужно обращаться к врачу. Первоначально это врач общей практики, то есть терапевт. Далее обследованием занимаются гематолог и смежные специалисты.

Если диагностически будет установлено, что показатели ниже или выше допустимых, в обязательном порядке нужно проходить лечение, так как большая часть этиологических факторов представляет опасность не только для здоровья, но и для жизни пациента.

Лечение будет полностью основываться на первопричинной патологии. Терапевтические мероприятия могут быть как консервативными, так и радикальными. Прогноз носит исключительно индивидуальный характер.

3. Методика определения осмотической резистентности эритроцитов и диаметра эритроцитов. Определение скорости оседания эритроцитов (соэ). Диагностическое значение.

Резистентность – свойство эритроцитов противостоять разрушительным воздействиям: тепловым, осмотическим, механическим и др. В клинике наибольшее значение приобрело определение осмотической резистентности.

Принцип метода состоит в том, что эритроциты в гипертонических солевых растворах сморщиваются, а в гипотонических – набухают. При значительном набухании наступает гемолиз.

В пробирках готовят растворы хлорида натрия различной концентрации (от 0.70 до 0.22%), затем вносят в них один и тот же объем крови (0.02 мл) и оставляют на час при комнатной температуре. Через час пробирки центрифугируют и определяют начало гемолиза по легкому порозовению раствора и полный гемолиз – по интенсивной красно-лаковой окраске раствора.

В норме минимальная резистентность у взрослых людей колеблется между 0,48% и 0,46% хлорида натрия, максимальная – между 0,34% и 0,32% хлорида натрия.

Снижение осмотической резистентности эритроцитов наблюдается при наследственном микросфероцитозе (болезнь Минковского-Шоффара), аутоиммунных гемолитических анемиях. Повышение осмотической резистентности эритроцитов встречается при наследственных гемолитических анемиях, связанных с дефицитом глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, при некоторых гемоглобинопатиях (талассемия).

Измерение диаметра эритроцитов и графическую регистрацию распределения эритроцитов по величине (эритроцитометрическая кривая Прайс-Джонса) производят с помощью прямых микроскопических и электронно-автоматических методов.

Прямой микроскопический метод – это измерение диаметра эритроцитов в фиксированном и окрашенном мазке крови с использованием окуляр – микрометра и объектив-микрометра. Измеряют диаметр 200-500 различных эритроцитов, результаты распределяют по группам в зависимости от величины диаметра и устанавливают в процентах (%) относительную численность каждой группы.

Нормы: содержание нормоцитов (диаметр 6.9-8.0 мкм) составляет приблизительно 68%, микроцитов (диаметр менее 6.9 мкм) – 15%, макроцитов (диаметр более 8.0 мкм) – 17%.

Прямой микроскопический метод чрезвычайно трудоемок, отнимает много времени и поэтому уступает электронно-автоматическому методу.

Электронно-автоматический метод – это подсчет эритроцитов различного диаметра с помощью счетчиков «Культер» и «Целлоскоп».

Эритроцитометрическая кривая Прайс-Джонса в норме имеет правильную форму с вершиной на 7.2 мкм и довольно узким основанием в пределах 6-9 мкм.

Увеличение диаметра эритроцитов (макроцитоз) со сдвигом кривой Прайс – Джонса вправо наблюдается при мегалоцитарных анемиях (витамин-В₁₂-фолиеводефицитные), при заболеваниях печени, при алкоголизме.

Уменьшение диаметра эритроцитов (микроцитоз) со сдвигом эритроцитометрической кривой влево встречается при наследственном микросфероцитозе, железодефицитной анемии, интоксикации свинцом.

Нормальные эритроциты имеют форму диска с вдавлением в центре. В патологических случаях могут появлять­ся эритроциты с измененной формой. Изменение формы эритроцитов называется пойкилоцитозом. Встречаются следующие формы эритроцитов.

Сфероциты – эритроциты, имеющие округлый или ша­рообразный вид, утратившие двояковогнутую форму. Микросфероциты имеют иногда обычные размеры. Сфероцитоз бывает наследственным и приобретенным. Наблю­дается при наследственном микросфероцитозе (болезнь Минковского-Шоффара), гемолитических анемиях, сеп­сисе, искусственных клапанах сердца.

Овалоциты (эллиптоциты) – эритроциты овальной фор­мы. Встречаются при талассемии, наследственном овалоцитозе, тяжелых железодефицитных анемиях, анемиях при лейкозах.

Мишеневидные эритроциты (таргентные клетки, лептоциты) – плоские, бледные, с центральным скоплением гемоглобина в виде мишеней. Бывают при талассемии, тя­желых железодефицитных анемиях, после спленэктомии, при различных видах желтух, алкоголизме. Стоматоциты — центральное просветление у таких эритроцитов изогнуто, напоминает форму рта. Встречают­ся при наследственных стоматоцитозах (относятся к гемо­литическим анемиям), после переливания крови, при опу­холях и циррозе печени, остром алкогольном отравлении.

Акантоциты – эритроциты зазубренной формы, имею­щие выпячивания различной величины. Обнаруживают­ся при наследственных акантоцитозах, тяжелых заболе­ваниях печени (токсических гепатитах, циррозах), гипо­тиреозе, терапии гепарином, хроническом алкоголизме, после спленэктомии.

Эхиноциты – эритроциты с несколькими выростами, как бы покрытые шипами, колючками. Такие формы наб­людаются при тромбоцитопенической пурпуре, раке же­лудка, уремии. Если в мазке все эритроциты имеют такую форму, это говорит о неправильной фиксации мазка.

Каплевидные эритроциты имеют форму капель. Встре­чаются при миелофиброзе и токсических гепатитах.

Анулоциты – эритроциты в виде пустых колец. Наблю­даются в периферической крови при тяжелых формах железодефицитных анемий.

Серповидные эритроциты (дрепаноциты) имеют форму серпов, полулуний, овсяных зерен. Образуются в крови при серповидно-клеточной анемии.

В отличии от анизоцитоза, пойкилоцитоз является бо­лее поздним признаком анемии и отмечается при более тя­желом течении.

В норме зрелые эритроциты периферической крови не содержат никаких включений. И только в ретикулоцитах при суправитальной окраске красителем бриллиант-крезил-блау выявляется зернистосетчатая субстанция.

При различных патологических состояниях в перифе­рической крови обнаруживаются эритроциты с различны­ми включениями: базофильная пунктация — мелкая, си­него цвета, равномерно расположенная в цитоплазме зер­нистость, встречается при отравлении свинцом, ртутью и нередко при некоторых анемиях (мегалобластные, талассемия и др.); крапчатость Шуффнера – мелкая красного цвета зернистость, отмечается при трехдневной малярии; пятнистость Маурера – небольшие сиреневого или красно­го цвета пятнышки, встречаются при тропической маля­рии; тельца Гейнтца-Эрлиха – круглые резко очерченные включения по периферии эритроцита, появляются при отравлении гемолитическими ядами типа нитробензола, анилина, фенилгидразина, при лучевой болезни; тельца Жолли – круглые, сине-фиолетового цвета образования; кольца Кебота – нежные петельки красного цвета. Они имеют вид колечка, восьмерки или скрипичного ключа. Тельца Жолли представляют собой остатки ядерной суб­станции нормобластов, а кольца Кебота – остатки ядерной оболочки и встречаются главным образом при витамин-В₁₂– и фолиеводефицитной анемии, тяжелых отравлениях гемолити­ческими ядами.

Помимо телец Жолли и колец Кебота при витамин-В_12- и фолиеводефицитной анемии в периферической крови можно увидеть клеточные элементы мегалобластического типа кроветворения, который в норме отмечается только в эмб­риональном периоде.

При мегалобластическом кроветворении в кроветвор­ной ткани вместо эритробластов образуются мегалоблас­ты, которые способны к ранней гемоглобинизации при сохранившейся еще структуре ядра. По сродству к щелоч­ным или кислым красителям они подразделяются на базофильные, оксифильные и полихроматофильные. Большая их часть распадается в костном мозге, а меньшая – созре­вает до мегалоцитов, которые и поступают в перифериче­скую кровь. При резком обострении заболевания в пери­ферическую кровь попадают не только мегалоциты, но и мегалобласты. Мегалобласт представляет собой крупную клетку (диаметром более 15 мкм) с эксцентрично располо­женным круглым или овальным ядром. Мегалоциты – это безъядерные клетки размером от 12 до 15 мкм, значитель­но насыщенные гемоглобином. Поэтому цветной показа­тель, как правило, при В₁₂– и фолиево-дефицитной ане­мии больше 1,0 (эту разновидность анемии относят к гиперхромным).

Оседание эритроцитов – это свойство клеток крови осаждаться (седементировать) за пределами кровеносного русла (на дне сосуда при сохранении крови в несвертывающемся состоянии), оставляя сверху слой плазмы. Этот феномен лежит в основе определения скорости оседания эритроцитов (СОЭ), которая выражается в миллиметрах плазмы, отстаивающейся в течение часа.

Наиболее распространен микрометод определения СОЭ в модификации Панченкова.

Принцип метода: при стоянии крови, стабилизиро­ванной цитратом натрия, эритроциты оседают с различ­ной скоростью в зависимости от физико-химических свойств крови. Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) вы­ражается в мм/ч.

Оборудование и реактивы:

аппарат Панченкова, состоящий из штатива с капил­лярами шириной 1 мм, на стенке которых нанесены деле­ния от 0 (сверху) до 100 (снизу). На уровне 0 мм имеется бук­ва К (кровь), а на середине капилляра, около метки 50 мм – буква Р (реактив);

агглютационные (видалевские пробирки);

5% свежеприготовленный раствор натрия цитрата;

Ход исследования. В капилляр Панченкова набирают 5% раствор натрия цитрата до метки «Р» – 50 мм и выду­вают его в видалевскую пробирку. Затем этим же капил­ляром, держа его горизонтально, из уколотого пальца на­бирают два раза кровь до метки «К» – 0 мм и выпускают ее в пробирку с натрия цитратом. Хорошо перемешивают. Этим же капилляром набирают цитратную кровь до мет­ки «К» и ставят строго вертикально в штатив. Получен­ное соотношение объемов крови и натрия цитрата равно 1:4. Через 1 ч отмечают по делениям на капилляре число миллиметров освободившегося от эритроцитов столбика плазмы.

Интерпретация полученных данных. Нормальные показатели СОЭ:

у мужчин – СОЭ 1-10 мм/ч;

у женщин – СОЭ 2-15 мм/ч

Дети имеют более низкую СОЭ (1-8 мм/ч), чем взрослые, а лица среднего возраста меньше, чем старики.

Изменение СОЭ при патологии.

Значительное увеличение – опухолевые заболевания, диффузные болезни соединительной ткани, тяжелые инфекции, болезни почек, протекающие с нефротическим синдромом, выраженная витамин-В₁₂-фолиеводефицитная анемия.

Умеренное увеличение – острые и хронические инфекционные заболевания, локализированные гнойные процессы, инфаркт миокарда, гипертиреоз, тяжелый сахарный диабет, внутренние кровотечения, интоксикации ртутью и мышьяком.

Снижение – эритремия, вторичные симптоматические эритроцитозы, ацидоз, тяжелая сердечная недостаточность.

Определение осмотической резистентности эритроцитов

Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ)

Если кровь предохранить от свертывания (гемокоагуляция) и оставить на некоторое время в сосуде, то с течением времени в силу тяжести эритроциты осядут.

СОЭ характерна для каждого вида, пола, возраста животных (очень медленно СОЭ идет у крупного рогатого скота, овец и коз, умеренно быстро у свиней, очень быстро у лошадей) и зависит от состояния организма. При некоторых физиологических состояниях (например, беременность), аллергиях и при целом ряде заболеваний (туберкулез, анемия, гнойное воспаление и др.) СОЭ ускоряется. Поэтому определение СОЭ имеет важное диагностическое значение.

СОЭ зависит от скорости склеивания (агглютинации) эритроцитов. При этом образуются так называемые “монетные столбики”. Агглютинация эритроцитов зависит от изменения отрицательного заряда (вследствие чего они отталкиваются друг от друга) на положительный. Электроположительный заряд сообщается эритроцитам за счет адсорбции (поглощения) на их поверхности грубодисперсных белков-глобулинов.

Ход работы Для определения СОЭ применяют прибор Панченкова. Прибор представляет собой штатив, в котором укреплены в вертикальном положении специальные капилляры, Капилляры градуированы в миллиметрах. Метка 0 стоит на расстоянии 100 мм от конца. На капилляре есть еще две метки: К (кровь) – на высоте куля и метка Р (реактив) – на уровне 50 мм.

Капилляр промывают 5% раствором цитрата (лимоннокислый натрий). Затем набирают цитрат до метки Р и выдувают его в чашку Петри. Затем, в этот же капилляр, двукратно набирают кровь животного до метки К. Обе порции крови смешивают с имеющимся в чашке Петри цитратом. Полученную смесь крови с цитратом (в соотношений 4:1) набирают в капилляр до метки О и ставят капилляр в штатив. Через час смотрят какова высота в миллиметрах образовавшегося верхнего столбика плазмы в капилляре. Его величина и является мерой СОЭ.

Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)

Крупный рогатый скот – 0,5-1,5; овцы, козы – 0,5-1; кролики – 1-2; куры – 2-3; собаки – 2-6; свиньи – 2-9; лошади – 40-70 мм/ч. Человек: мужчины – 3-9, женщины 7-12, новорожденные – 0,5, беременные – 45мм/ч.

Воспроизведение гемолиза

Гемолиз –выход гемоглобина из эритроцитов через измененную оболочку в плазму. Гемолиз может происходить как в сосудистом русле, так и вне организма.

1. Вне организма гемолиз может быть вызван гипотоническими растворами – осмотический гемолиз.

Изотонический (физиологический) раствор – раствор хлористого натрия (0,85-0,9% раствор NaСl), имеющий осмотическое давление, одинаковое с осмотическим давлением крови.

Эритроцит + физиологический раствор → эритроцит

Гипертонический раствор – раствор с более высоким осмотическим давлением, чем давление крови.

Эритроцит + гипертонический раствор→сморщивание

Гипотонический раствор – раствор с более низким осмотическим давлением, чем давление крови.

Эритроцит + гипотонический раствор→эритроцит разбухает, оболочка разрушается, гемоглобин выходит в раствор

2. Механический гемолиз. Наблюдается при резком встряхивании, перемешивании крови.

3. Химический гемолиз. Возникает при действия кислот, щелочей, эфира, хлороформа. спирта, гемолизинов, которые вызывают денатурацию (свертывание) белков, разрушение липидов и нарушение целостной оболочки эритроцита.

4. Физический гемолиз. Низкая температура вызывает разрушение эритроцитов. Высокая – денатурацию белков оболочки эритроцитов.

5. Биологический гемолиз. Возникает при укусах ядовитых змей, скорпионов, множественных укусах пчел, при малярии, переливании несовместимой крови. В здоровом организме сосудистый гемолиз происходит лишь в печени, селезенке, красном костном мозге. Такой гемолиз не сопровождается появлением гемоглобина в плазме циркулирующей крови, Биологический гемолиз вызывает появление гемоглобина в плазме крови (гемоглобинемия) и выделение его с мочой (гемоглобинурия).

В штатив ставят три пробирки: в 1-ю наливают 2 мл физ.раствора, во 2-ю – 2 мл физ.раствора и 5 капель нашатырного спирта, в 3-ю – 2 мл дистиллированной воды. Затем каждую пробирку добавляют по 2 капли крови и, слегка встряхивая пробирки, перемешивают их содержимое. При наличии гемолиза раствор в пробирке становится прозрачным с «лаковым» оттенком.

Определение осмотической резистентности эритроцитов

Осмотическая резистентность эритроцитов – свойство их противостоять разрушительному воздействию неблагоприятных факторов (физических, химических, механических и др.).

Сущность метода определения осмотической резистентностью эритроцитов заключается в определении устойчивости их к действию гипотонических растворов хлористого натрия. Осмотическая резистентность эритроцитов определяется той концентрацией раствора, при которой еще не наступает гемолиз.

1 2 3 4 5 1% раствор NaCl, мл 1 3 5 7 9 Дистиллированная вода, мл 9 7 5 3 1 Всего, мл 10 10 10 10 10 Концентрация NaCl, % 0,1 0,3 0,5 0,7 0,9

В каждую из 5 пробирок с разной концентрацией растворов внести по 2 капли крови, поставить в штатив на 10-15 мин.

В пробирках №1 и №2 произойдет полный гемолиз, в пробирке №3 – частичный гемолиз (раствор окрашивается в слабо-розовый цвет, неразрушенные эритроциты оседают на дно). В пробирках №4 и №5 – гемолиз не произойдет. Через 60-90 мин эритроциты осядут на дно, раствор обесцветится. Из этого следует, что граница резистентности эритроцитов лежи в пределах между 0,5-0,7% раствором хлористого натрия.

1. Каков механизм влияния различных факторов на СОЭ?

2. Как влияет на скорость оседания эритроцитов: увеличение числа эритроцитов в «монетных столбиках» и увеличение содержания глобулинов в плазме крови?

3. Что такое гемолиз? Какие виды гемолиза существуют?

4. Какой механизм гемолиза в каждом из наблюдаемых Вами случаев?

5. Что такое осмотическая резистентность эритроцитов?

6. Как определяют осмотическую резистентность эритроцитов?

1. Г.И. Азимов, Д.Я. Криницин; Н.Ф. Попов Физиология с.-х. животных. – М.- 1958.

2. Большой практикум по физиологии человека и животных. / Под ред. Л.Л. Васильева, И.А. Ветюкова. – М. – 1954.

3. С.И. Гальперин Физиология человека и животных. Учебное пособие для студентов университетов и педагогических факультетов. – М. – 1970.

4. Физиология человека / С.А. Георгиева, Н.В. Белинина, Л.И. Прокофьева, Г.В. Коршунов, Е.Ф. Киричук, В.М. Головченко_, Л.К. Токаева. – М.: Медицина. – 1981.

5 Физиология человека / Под ред. Г.И. Косицкого, 3-е изд., перераб. и доп. – М.: Медицина, 1985. – 544 с.

6. Руководство к практическим занятиям по физиологии / Под ред. Г.И. Косицкого, В.А. Полянцева. – М.: Медицина, 1988.

7. Коробков А.В., Чеснокова С.А. Атлас по нормальной физиологии: Пособие для студ. мед. и биол. вузов / Под ред. Н.А. Агаджаняна. – М.: Высш.шк., 1986. – 351 с.

8. Георгиевский В.И. Практическое руководство по физиологии с.-х. животных. Учеб. пособие для с.-х. вузов. М.: Высш.шк. – 1976. – 352 с,

РОССИЙСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ДРУЖБЫ НАРОДОВ

КАФЕДРА АНАТОМИИ, ФИЗИОЛОГИИ

И ХИРУРГИИ ЖИВОТНЫХ

по физиологии и этологии животных:

Дата добавления: 2018-02-28 ; просмотров: 482 ; ЗАКАЗАТЬ РАБОТУ

Симптомы осмотической резистентности эритроцитов и метод определения показателей

Эритроциты (другое название – красные кровяные тельца) – это клетки крови, главная функция которых – транспортировка кислорода с кровью от легких ко всем органам и тканям и перемещение углекислого газа в обратном направлении. Любое нарушение нормального функционирования организма может привести к изменению состава крови и, соответственно, к негативному воздействию на эти клетки.

Термин «резистентность» (от латинского resistentia – устойчивость, сопротивление) означает сопротивляемость какому-либо фактору. В данной статье речь пойдет об осмотической стойкости эритроцитов.

Осмотическое давление (от греческого osmos – давление, толчок) возникает в результате проникновения через полупроницаемую мембрану воды из раствора с меньшей концентрацией в раствор с большей для достижения равновесия.

Осмотическая резистентность эритроцитов

Относительно эритроцитов рассматривают систему «плазма крови – мембрана – цитоплазма (внутреннее содержимое клетки)». Но в организме человека мембрана каждой клетки избирательно проницаема, то есть концентрации большинства веществ в цитоплазме клетки и окружающей ее среды различны.

Способность эритроцитов препятствовать осмотическому давлению и называется осмотической резистентностью.

Метод определения показателя

В лаборатории исследование осмотической устойчивости эритроцитов проводят разведением крови в растворах поваренной соли (NaCl) различных концентраций. В сравнении с содержанием ионов натрия и хлора в цитоплазме эритроцитов выделяют растворы:

• Изотонический. Концентрация соли равна примерно 0,9% – это ее норма в крови. В нем изменения клеток крови не происходит. Широко известно другое его название – физиологический раствор (физраствор).
• Гипотонические. Концентрация ионов в них ниже, из-за осмотического давления в эритроциты поступает вода, и они набухают вплоть до гемолиза (разрушения).
• Гипертонические. Содержание соли в них больше – клетки отдают воду и съеживаются.

Методика оценки осмотической резистентности эритроцитов следующая:

• в пробирки наливают гипотонические растворы (так как в них наблюдается гемолиз) поваренной соли различных концентраций (обычно в диапазоне от 0,22 до 0,7%);
• добавляют по 0,02 миллилитра собранной из пальца или из вены (оттуда результаты будут «чище») крови;
• полученные растворы держат на экспозиции около часа (для воздействия осмотического давления на эритроциты);
• после содержимое пробирки центрифугируют.

По оттенку определяют степень гемолиза (полный гемолиз – ярко-красный раствор, его начало – раствор с розоватым оттенком), для получения более точных показателей используют фотоколориметр – аппарат для оптического измерения концентрации вещества.

В лабораторной диагностике для определения осмотической резистентности эритроцитов используют следующие показатели:

• Максимальная резистентность. Она равна концентрации раствора NaCl, при которой в течение трех часов происходит полный гемолиз. Норма для взрослого человека – от 0,32 до 0,34%; норма для детей грудного возраста – 0,24-0,32%, дошкольного возраста – 0,26-0,36%.
• Минимальная резистентность. Равна концентрации того же раствора, при которой в течение трех часов гемолизу подвергаются только малоустойчивые клетки (цвет раствора получится слегка розовым). Норма для взрослого человека – 0,46-0,48%; норма для детей грудного возраста – 0,46-0,50%, дошкольного возраста – 0,46-0,48%.

В целом у людей солидного возраста осмотическая резистентность эритроцитов ниже; у детей она выше, но ее диапазон шире.

Причины изменения показателей

Повышение осмотической стойкости (максимальная резистентность меньше 0,32%) возникает при следующих патологиях:

1. Массивные кровопотери (более 5% от объема крови), так как в качестве компенсаторного механизма в крови увеличивается число молодых эритроцитов, но в условиях дефицита ресурсов. В итоге образуется большое количество клеток с недостаточно прочными мембранами.
2. Атеросклероз: производные холестерина могут откладываться на мембране эритроцита, что приводит к изменению ее свойств.
3. Механическая желтуха, ее причины: закупорка желчевыводящих протоков вследствие образования желчных камней, заболевания желчного пузыря и некоторые болезни печени.
4. Наследственные анемии, связанные с изменением структуры гемоглобина (гемоглобинопатии): талассемия, серповидно-клеточная анемия.
5. Наследственные заболевания, в результате которых изменяется структура мембраны эритроцитов (мембранопатии).
6. Состояние после удаления селезенки.
7. Истинная полицитемия – чрезмерное увеличение количества клеток крови из-за опухоли в кроветворных органах.
8. Рак органов желудочно-кишечного тракта.

Снижение осмотической резистентности (минимальная становится выше 0,48%) может быть связано с:

1. Отравлением свинцом и его производными.
2. Гемолитической анемией, при которой происходит массивный гемолиз красных кровяных телец. Причины различны: аутоиммунные, наследственные заболевания, гемолитическая желтуха новорожденных и другие.
3. Небольшое снижение возможно из-за туберкулеза, сердечной недостаточности, лейкоза (рак крови), цирроза печени.

Симптомы патологической резистентности эритроцитов и способы борьбы

В норме одним из признаков «старых» эритроцитов (срок нахождения в плазме крови: 100-120 дней) становится низкая осмотическая резистентность. Другой – форма клетки: зрелые эритроциты двояковогнутые, молодые – слегка плоские, а заканчивающие клеточный цикл – сферические. Иммунные клетки опознают последние и разрушают в селезенке.

Патологическая осмотическая резистентность эритроцитов может привести к неконтролируемому гемолизу прямо в кровяном русле, что приводит к следующим симптомам:

• бледность слизистых оболочек, иногда – кожных покровов;
• быстрая утомляемость;
• ухудшение аппетита;
• снижение массы тела;
• постоянное повышение температуры;
• сонливость.

Из-за малой специфичности симптомов данную патологию чаще обнаруживают лишь после лабораторных исследований. Наиболее эффективный способ лечения – устранение причины, то есть основного заболевания (если оно наследственное, то проводят симптоматическую терапию). Профилактические меры общие: здоровый образ жизни, правильное питание, своевременное обращение к специалистам.

Осмотическая резистентность эритроцитов — понятие, метод определения показателей

Для оценки физико-химических свойств эритроцитов исследуют их резистентность к различным воздействиям. Наиболее часто в практике определяют осмотическую резистентность эритроцитов. Различают минимальную и максимальную резистентность. Минимальная резистентность эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического (менее 0,85%) раствора натрия хлорида (в серии постепенно уменьшающихся концентраций), при которой начинается гемолиз наименее устойчивых эритроцитов, находящихся в растворе 3 ч. Максимальная резистентность эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического раствора натрия хлорида, вызывающего в течение 3 ч гемолиз всех эритроцитов.

Унифицированная методика определения осмотической резистентности эритроцитов в модификации Л. И. Идельсона

Принцип . Количественное определение степени гемолиза эритроцитов в забуференных гипотонических растворах натрия хлорида.

Реактивы : основной раствор (по осмотической концентрации соответствует 10% раствору натрия хлорида), pH 7,4: натрия гидрофосфат безводный (Na₂HPO₄) — 27,31 г или кристаллогидрат (Na₂HPO₄ × 2Н₂0) — 34,23 г; натрия дигидрофосфат кристаллогидрат (NaH₂PO₄ × 2Н₂O) — 4,86 г: натрия хлорид — 180 г; дистиллированная вода — до 2 л. Раствор можно хранить в закрытой посуде в холодильнике несколько месяцев.

Основной раствор разводят в 10 раз дистиллированной водой и получают раствор, по осмотической концентрации соответствующий 1% раствору натрия хлорида. Из этого раствора готовят рабочие растворы, соответствующие растворам натрия хлорида следующих концентраций: 0,85; 0,75; 0,70; 0,65; 0,60; 0,55; 0,50; 0,45; 0,40; 0,35; 0,30; 0,20; 0,10%%. Целесообразно приготовить по 100 мл этих рабочих растворов. Хранят в холодильнике, пригодны они в течение 2 нед.

Специальное оборудование : 1) фотоэлектроколориметр; 2) термостат на 37 °С.

Ход определения . В две стерильные пробирки с 2 каплями гепарина (500 ЕД) вносят по 1,5 мл крови, перемешивают и одну используют для иссле дования, а вторую оставляют на сутки в термостате. В ряд центрифужных пробирок (14 шт.) разливают по 5 мл каждого из рабочих растворов с концентрацией натрия хлорида от 1 до 0,10%. В каждую пробирку добавляют по 0,02 мл гепаринизированной крови и оставляют на 30 мин при комнатной температуре. Центрифугируют смесь при 2000 об./мин в течение 5 мин. Из каждой пробирки сливают надосадочную жидкость и фотометрируют при длине волны 500–560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с длиной оптического пути 1 см против контрольной пробы.

Контрольная проба — надосадочная жидкость в пробирке, содержащей рабочий раствор с концентрацией натрия хлорида 1%.

Расчет . За полный (100%) гемолиз принимают гемолиз в пробирке с 0,1% раствором натрия хлорида. Вычисляют процент гемолиза в каждой пробирке, сравнивая величину экстинкции надосадочной жидкости с экстинкцией, принятой за 100 %, по формуле:

где Е₁ — экстинкция надосадочной жидкости в пробирке с 0,1% раствором натрия хлорида; Е_х — экстинкция исследуемой пробы; 100 — полный гемолиз в пробирке с 0,1% раствором натрия хлорида.

На следующий день повторяют исследование с кровью, инкубированной в течение 24 ч при 37 °С.

Нормальные величины. У здоровых людей в свежей крови гемолиз (минимальная резистентность эритроцитов) начинается при концентрации натрия хлорида 0,50–0,45 %, а полный гемолиз (максимальная резистентность эритроцитов) наблюдается в 0,40–0,35% растворе натрия хлорида.

Клиническое значение. Данное исследование проводят при подозрении на гемолитическую анемию. Наименее устойчивы к гипотоническим растворам сфероциты (появление гемолиза эритроцитов отмечено при более высоких концентрациях натрия хлорида 0,75–0,70 %). Понижение осмотической устойчивости наблюдается не только при наследственном микросфероцитозе, но и при некоторых наследственных несфероцитарных гемолитических анемиях, при аутоиммунной гемолитической анемии. Повышение осмотической резистентности эритроцитов характерно для талассемии, гемоглобинопатии, возможно при механической желтухе.

Осмотическая резистентность эритроцитов

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

1. Штатив.
2. Пробирки химические или серологические.
3. Пипетки градуированные.
4. Капилляр к гемометру Сали.
5. Набор для укола в палец.
6. 1% раствор поваренной соли.
7. Дистиллированная вода.

Определение осмотической резистентности по Лимбеку и Рибьеру

Определение основано на различной сопротивляемости эритроцитов по отношению к гипотоническим раствором NaCl. При определении осмотической резистентности эритроцитов соблюдают следующие правила:

1. Готовят точный 1% раствор поваренной соли и из него тщательно приготавливают гипотонические растворы NaCl.
2. Разливают гипотонические растворы поваренной соли начиная с наибольшего ее разведения.
3. Взятую кровь приливают в пробирки начиная с наименьшего разведения поваренной соли.

Для исследования необходимы следующие реактивы:

1. 1% раствор поваренной соли: 10 г химически чистого NaCl помещают в 1 л мерную колбу и доливают дистиллированной водой до метки.
2. Растворы хлористого натрия различной концентрации готовят из 1% раствора NaCl по схеме, приведенной на следующем рисунке.

Техника определения . В штатив устанавливают 26 пробирок, маркируют их соответственно концентрации гипотонических растворов NaCl.

Градуированной пипеткой берут по 1 ил каждого раствора и наливают в соответствующую пробирку (растворы разливают начиная с 0,2% концентрации NaCl). В каждую пробирку, начиная с 0,7% концентрации NaCl, вносят по 0.02 мл крови, взятой капилляром от гемометра. Содержимое пробирок смешивают и оставляют при комнатной температуре; результаты учитывают через 6 часов (лучше через сутки). Минимальную резистентность учитывают по разведению NaCl той пробирки, где под осадком из эритроцитов жидкость окрашена в слегка желтоватый цвет. Максимальную резистентность учитывают по разведению NaCl той пробирки, в которой эритроциты полностью гемолизированы (кровь в пробирке прозрачная и ярко-красная).

В норме минимальная резистентность эритроцитов колеблется в пределах 0,5-0,46, а максимальная — 0,32-0,3.