Определение гемоглобина в крови – методы диагностики, строение и физиология гемоглобина

Определение гемоглобина в крови: методы диагностики

Методы определения содержания гемоглобина в крови разнятся между собой. Их особенности зависят от реактива, который используется в лабораториях, безопасности исследования, его точности и скорости. По результатам анализов проходит диагностика.

Клиническое значение определения гемоглобина

Гемоглобин образуется в эритроцитах. Делая вдох, кровяные тельца насыщаются кислородом. Через них белок по крови «доставляет» кислород в ткани, а затем, возвращаясь, углекислый газ попадает в легкие. Именно Hb в какой-то мере отвечает за такую важную функцию, как дыхание.

У взрослого человека значения гемоглобина зависят от пола. У женщин концентрация клеток ниже, так как их мышечная масса обычно меньше:

• 12-16 г/% или 120-160 г/л для мужчин;
• 11-14г/% или 110-140 г/л для женщин.

Эти показатели являются нормой. Их изменения в большую или меньшую сторон говорит о заболевании. Во время беременности или в пожилом возрасте показатели могут снижаться. Если понижение не связано с этими факторами, врачи часто диагностируют:

• железодефицитная, серповидно-клеточная анемия, которая приводит к уменьшению эритроцитов;
• недостаток фолиевой кислоты или витамина В12;
• болезни красного костного мозга.

Повышение гемоглобина тоже ведет за собой плохие последствия. Часто симптом связан с рядом проблем:

• злокачественные новообразования, болезни красного костного мозга;
• увеличение числа эритроцитов в связи с сердечно-сосудистых и легочных заболеваний;
• уменьшение плазмы крови.

Гемоглобин образуется в эритроцитах после того, как пропадает ядро или приобретения клетки зрелости. Селезенка утилизирует красные кровяные тельца и Hb. 1 клетка живет 4 месяца. После того, как она погибает, в крови образуется железо. Оно попадает в красный костный мозг. С его помощью появляются новые красные кровяные клетки.

Методы измерения гемоглобина в крови

Определение концентрации гемоглобина возможно с помощью нескольких методов. Hb измеряют еще и в моче, так как в мочевыводительной системе бывают кровотечения (как незначительные, так и обильные).

Различают несколько основных форм гемоглобина:

• оксигемоглобин;
• карбоксигемоглобин;
• дезоксигемоглобин.

Для анализа все формы Hb с помощью реактивов делают одинаковыми, чтобы их мог считать прибор. После применения определенной методики, используют полуавтоматический анализатор. С его помощью измеряют спектр длины волны молекулы гемоглобина.

Такой анализатор исключает возможность реставрации ошибки врача в отчете необходимого значения. Аппарат также не способен увидеть и распознать различные нарушения в параметрах.

Ручной подсчет применяется с реактивом и биолоатериала. Такой способ не считает количество клеток, а определяет их присутствие в жидкости. Часто используют для анализа мочи.

Унифицированные методы определения гемоглобина

Исследование является точный, быстрым и используется в большинстве лабораторий. Для Hb подходит гемицианидный метод с фотоколориметрическим подсчетом. Метод основывается на определении точного числа клеток при помощи подсчета длины волны молекулы на специальном полуавтоматическом приборе.

Другой способ — гимехромный. Проводится также, однако для него используются более качественные реактивы, которые не вредят здоровью исследователя. Метод является более щадящим и применяется чаще первого.

Гемиглобинцианидный метод определения гемоглобина в крови

Определить длину Hb сложно, так как он имеет много разных форм. Для упрощения процесса и более точных результатов его превращают в метгемоблогин. Делается это с помощью специальных химических веществ.

Чтобы правильно провести анализ необходим трансформирующий раствор, измерительные пробирки, фотоэлектроколориметр. Длина волны гемоглобина составляет 540 м. В таком пределе аппарат определяет нужный показатель. Полученный результат высчитывается по формуле и переводится в значение граммы на литры.

Этот метод одобрен Комитетом здравоохранения из-за того, что он является максимально точным. Он имеет много положительных сторон:

• дешевизна реактивов, которая не требует от медицинского учреждения большого бюджета;
• простата в проведении: даже студент-лаборант сможет провести процедуру;
• скорость анализа;
• использование полуавтоматического анализатора, что исключает врачебную ошибку в подсчетах.

Несмотря на все плюсы, методику считают устарелой. У нее есть ряд серьезных недостатков:

• используемые вещества опасны для здоровья врача: при неправильной эксплуатации возможны поражение слизистых, кожи, дыхательных путей;
• наличие современных и полностью безопасных методов работы;
• врачебная ошибка возможна на этапе выбора дозировки реактивов.

Метод проводится с использованием цианидных компонентов, что является опасным для здоровья врачей химикатом.

Гемиглобинцианидный способ исследования -точный анализ, который применялся раннее в каждом лаборатории. Сейчас же на смену ему пришли более современные методы.

Гемихромный метод определения гемоглобина в крови

Здесь клетки Hb переводят в форму гемихрома (HbChr). Его легко удается подсчитать. По полученному числу врачи определяют концентрацию гемоглобина в биоматериале. Методика имеет множество плюсов:

• 2 варианта забора материала: капилярная крови или венозная;
• скорость исследования. Результаты будут готовы в день сдачи;
• безопасность для сотрудников, так как при анализе не используются опасные для здоровья вещества;
• полуавтоматический анализатор, который используют для подсчета количества клеток. Исключает врачебную ошибку;
• простота метода и цена используемых реактивов;
• высокая точность показателей, на основе которых врач делает выводы о состоянии пациента;
• использование небольшого количества крови. Если результаты показались сомнительными, анализ всегда можно сделать повторно.

Исследование полностью безопасно, но и у него есть ряд минусов. Делая выводы по поводу диагноза, специалист всегда должен помнить о недостатках методики:

• ошибки при сборе крови;
• неправильная концентрация реактивов или их неверное подготовление;
• размер клеток и их форму рассмотреть невозможно, так как фотометр лишь подсчитывает их количество.

Гемихромный метод используется врачами довольно часто для постановки диагноза больному. Он точен, безопасен и не затратен для больницы, поэтому очень популярен при анализе крови.

Цианидный метод исследования гемоглобина в крови

В капиллярную или венозную крови добавляется трансформирующий раствор. С его помощью образуется метгемоглобин.

Цианид — опасное вещество, которое может навредить здоровью врачей-лаборантов. Поэтому метод является опасным и практически не проводится в медицинских учреждениях.

В пробирке смешивают 5 мл реагента и 20 мл биоматериала. В течение 10 минут происходит реакция. Жидкость выливают в специальный сосуд, через который фотоэлектроколориметр пропускает лучи. Он подсчитывает количество элементов, длина которых составляет 543 нм. Содержание гемоглобина высчитывается далее по формуле.

Метод сали для определения гемоглобина в крови

Анализ основывается на визуальном определении содержания гемоглобина, то есть на колориметрии. Это делают при сравнении окраски исследуемого материала с раствором солянокислого гематина.

В кровь человека добавляют хлористоводородную кислоту. Благодаря этому Hb переходит в форму солянокислого гематина. В раствор далее наливают дистиллированную воду (до тех пор, пока цвет не будет таким же коричневым, как в контрольной пробирке). Для сравнения используют специальный колориметрический аппарат.

Снизу пробирки будет цифра, которая показывает содержание показателя в 100г крови. Чтобы выделить количество клеток в литре, результат умножают на 10. Далее врач рассчитывает результаты по формуле.

Метод имеет погрешность в 30%, что делает его недостаточно точным для постановки диагноза больному. Из-за этого лаборанты применяют его в работе редко.

Читайте также

Метод спектрального анализа для измерения гемоглобина

Использование спектофотометра гарантирует максимальную точность результатов исследования. Для выявления гемоглобина, необходимо перевести клетки в единую форму, так как прибор может улавливать только одну из его форм. Для этой цели берут различные реактивы.

Нужные элементы окрашивают (в красный или зеленый цвет), потом аппарат в выбранном диапазоне вылавливает длину волны клеток и подсчитывает их.

Аммиачный метод определения гемоглобина

Проведение исследования проходит по тому же принципу, что и в других методах. Главное отличие состоит в использовании аммиака в концентрации 0,04.

Сначала проба настаивается какое-то время, чтобы гемоглобин перешел в одну форму. Далее ее подсчитывает прибор — полуавтоматический анализатор спектрофометр. Раствор переливают в пробирку под лучи аппарата. Он выделяет волны длинною в 543 нанометров.

Цианметгемоглобиновый метод

Еще один анализ, который считается наиболее точным. Он основывается на свойстве железосодержащего пептидного соединения превращаться в цианметгемоглобин после добавления в биологической жидкости химическое вещество.

Реактивом выступает раствор Драбкина. Соотношение биоматериала и реагента: 2:500. Через полчаса от начала процедуры замеряют клетки длиной в 550 нм, а также уровень свободного железосодержащего пептида в плазме.

Полученные растворы сравнивают по цвету при помощи колометрии. По итогу лаборанты рисуют таблицы и узнают о количестве железосодержащего пептидного соединения в кровотоке.

Исследование мочи

Мочу возможно обследовать 4 способами. Биоматериал используют только свежий. Гемоглобин в настоявшейся урине превращается в метгемоглобин и реакция не получится.

Чтобы подготовить материал к анализу, в него добавляют 2 мл уксусной кислоты и 5 мл диэтилового эфира.

Для проведения исследования возможно несколько вариантов. Выбирают его в зависимости от условий проведений исследования:

• гваяковая кислота. Щепотку вещества разводят и добавляют 3 мл этанола 96%. 8-10 капель раствора наливают в такому же количеству мочи. При наличии там Hb, жидкость окрасится в синий цвет;
• амидопирин. В 2-3 мл урины добавляют 10 капель амидопирина и столько же перекиси водорода 3%. Раствор станет фиолетовым, если в нем есть гемоглобин;
• бензидит. В емкости смешивают 6 капель бензидита и перекиси водорода 3% с 4 каплями мочи. При положительном результате раствор станет зеленым;
• тест-полоски, таблетки. Подходит для домашнего самостоятельного анализа. В них уже содержится специальный раствор реактивов. Полоску опускают в небольшое количество мочи, происходит реакция. По цвету определяются результаты. Таблетки просто растворяются в биоматериале. Индикаторная шкала всегда прописана на самой упаковке, поэтому с определением показателей справится любой человек.

Определения гемоглобина в моче наиболее целесообразно для быстрого домашнего обследования. Другие методы используются и в лабораториях.

Профилактика

Повышение или понижения уровня гемоглобина означает проблемы со здоровьем и различные серьезные заболевания. Чтобы избежать этого, придерживайтесь ряда правил:

• своевременная сдача крови. Хотя бы раз в год необходимо проводить плановый анализ, который поможет следить за уровнем Hb;
• отказ от курения. Табачный дым, который вдыхает человек, связывает гемоглобин с угарным газом, что снижает способность белка доставлять кислород в клетки организма;
• полноценное питание. Проблемы с гемоглобином могут возникнуть из-за строгих диет. Продукты, богатые белком (мясо, рыба, яйца, творог, сыр) способствуют профилактике анемии. Рекомендуется увеличить потребление продуктов, богатых железом — овсянки, пшена, гречневой каши;
• при болезнях ЖКТ внимательно следите за здоровьем, так как в периоды обострения возможны кровотечения. Это снижает уровень Hb в крови.

Читайте также

От гемоглобина во многом зависит общее состояние человека. Анализ на определения его уровня — один из главных и плановых ежегодных исследований, так как белок отвечает за важную функцию — поставку кислорода в клетки организма. Hb включен в процесс дыхания и доставки углекислого газа и в легкие, с помощью которого мы живем. Поэтому необходимо следить за показателями и сверять их с цифрами нормы для вашего пола и возраста.

Особенности определения гемоглобина в крови, основные методы диагностики и лечения патологических состояний

Общеклинический анализ крови – это первоочередное исследование, назначаемое больным при поступлении в муниципальные или частные клиники. Любые патологические изменения со стороны различных органов отражаются на составе крови.

Общеклиническое обследование крови

Общеклинический анализ исследует количественные и качественные свойства красных форменных элементов и содержание в них белка гемоглобина. Квантитативное (количественное) определение гемоглобина в крови – важная составляющая работы лабораторных сотрудников, направленная на своевременное выявление анемии.

Красные форменные клетки вырабатываются (с помощью животных белков, железа и витаминов) в красном костном мозге и разрушаются под действием ферментов селезенки. Они выполняют жизненно важные функции – транспорт кислорода к тканям и утилизацию оксидов углерода. Повышенный или пониженный гемоглобин указывает на патологии органов различной этиологии. В предложенном ниже видео показан процесс переноса оксидов.

Строение и физиология гемоглобина

Гемоглобин – это четвертичная глобула, которая занимается утилизацией и поставкой оксидов в организме человека. Данное пептидное соединение является тетрамером, состоящим из четырех субъединиц. Одна полипептидная структура способна переносить через кровоток до четырех молекул кислорода.

Железосодержащий белок

Гемоглобин состоит из простетической группы и глобулина. Простетическую группу железосодержащего пептида принято называть «гемом». Благодаря гему кровь приобретает свойственный ей окрас – алый или синевато-красный. Простетическая группа содержит железо, которое участвует в восстановительно-окислительных процессах.

Различают несколько основных видов гемоглобина:

• Оксигемоглобин;
• Карбоксигемоглобин;
• Дезоксигемоглобин;

Оксигемоглобин образуется при присоединении кислорода к гемоглобину в условиях высокого парциального давления. При отщеплении кислорода от железосодержащего белка образуется устойчивая форма – дезоксигемоглобин. Карбоксигемоглобин появляется в результате присоединения монооксида или диоксида углерода. Стоит отметить, что монооксид углерода в 250 раз эффективнее связывается с железосодержащим белком, чем обуславливается его опасность для жизни при вдыхании (угарный газ).

Дезоксигемоглобин сильно токсичен для тканей человеческого организма, поэтому существуют специальные системы «ликвидации» гемоглобина в крови. Этим занимается особое пептидное соединение – гаптоглобин.

Определение количества гемоглобина по методу Сали

Метод базируется на свойстве железосодержащего белка превращаться в хлорид гематита под действием соляной кислоты. Методика Сали считается неинвазивным вмешательством.

Интенсивность цвета жидкости прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в крови. Раствор хлоргемина при проведении исследования разводят дистиллированной водой до стандартного цветового спектра.

Метод Салли

Метод, который применяется для определения уровня гемоглобина, принято называть «гемометром Сали». Другое название современного метода определения гемоглобина по Сали – гемоглобинометрия. Такой колориметрический аппарат состоит из специального штатива, который имеет три гнезда.

Боковые гнезда держат две склянки с веществами. Среднее гнездо данного прибора необходимо для размещения пронумерованной мензурки из стекла. Градуированная мензурка обладает шкалой с делениями, которые измеряют количество железосодержащего пептидного соединения в граммах на децилитр (г/дл). При клиническом исследовании крови используется специальная пипетка для воды и размешивания содержимого склянки.

При проведении полного анализа по методу Сали вначале в склянку наливается 0.10% раствор соляной кислоты. Потом выполняется забор исследовательского материала из кончика пальца в пипетку до отметки «0.04 мл». Впоследствии пипетку обтирают стерилизованной ваткой и размещают в мензурку с раствором HCl.

Медицинский сотрудник несколько раз встряхнет содержимое пробирки и поставит отстаиваться. Полное химическое превращение железосодержащего пептидного соединения в растворе соляной кислоты происходит не менее чем за 10-15 минут.

По истечении пяти минут оценивается цвет жидкости в гемометре со стандартными цветами. Как правило, он более темный, нежели в стандартных пробирках. Используя обычную пипетку к раствору постепенно добавляют чистую воду, попеременно перемешивая содержимое и сравнивая со стандартным цветом. На окончательном этапе цвет материала должен сравняться с нормативом. После всего вышеперечисленного замеряют уровень жидкости и проводят соответствующие подсчеты.

В промышленном масштабе выпускаются гемометры, которые содержат исключительно грамм-процентную градуированную шкалу. Нормой гемоглобина у мужчин и женщин принято считать значения 15 г%, или 168 г/дл. Но даже при соблюдении определенных правил наблюдаются небольшие погрешности в измерениях. В некоторых случаях разные результаты могут в значительной мере исказить данные о болезни.

Цианметгемоглобиновый метод определения содержания гемоглобина в крови

Стандартизированным и наиболее точным методом определения гемоглобина принято считать гемоглобинцианидный анализ. Такая методика базируется на свойстве железосодержащего пептидного соединения превращаться в цианметгемоглобин при добавлении к биологическому материалу определенного вещества.

Содержание цианметгемоглобина замеряют фотометрически. При анализе крови в роли реактива применяется раствор Драбкина. Железосодержащий белок под влиянием синеродисто-железистого калия превращается в метгемоглобин, который потом преобразуется в присутствии цианина калия в гемиглобинцианид.

Цианметгемоглобиновый метод

Типичное соотношение разведения биологического материала с реагентом — 2 : 500 (0,04 миллилитров капель крови и 10 мл реактива). По истечении 30 минут, которые нужны для полного преобразования железосодержащего пептида в гемиглобинцианид, измеряют «гашение» при длине волны в 550 нанометров и плюс толщине слоя в 2 см против воды на спектрофотометре СФ или на ФЭК и ему похожей технике. С помощью СФ также измеряют уровень свободного железосодержащего пептида в плазме.

На данный момент разработаны гемиглобинцианидные цветовые стандарты в ампулах, которые точно соответствуют определенному уровню железосодержащего белка. Растворы, полученные в результате определенных реакций, исследуют с помощью колориметрии. После всего рисуют рабочие таблицы и узнают, какое количество железосодержащего пептидного соединения содержится в кровотоке.

Есть устройства, специально созданные для определения количества гемоглобина. Зачастую используются именно циангемоглобиновые методы определения гемоглобина. Как правило, гемоглобинометрические приборы могут работать самостоятельно. Широкое применение такие тест-устройства для определения гемоглобина в крови получили в домашних условиях. Однако в ряде ситуаций больные не учитывают влияние внешних факторов в доме (стресса, еды).

Другой набор методов диагностики уровня гемоглобина в крови

Значительную известность и распространение среди различных лабораторий получила методика гемихром (или гемихромный метод). Принцип данного метода основан на преобразовании всех форм железосодержащего пептида в гемихром, который имеет красноватый цвет. Преимущество гемихромного метода заключается в том, что он не является токсичным.

Иногда назначают прохождение биохимического исследования на гликированный гемоглобин. Стоит отметить, что важное значение гликозилированный гемоглобин и глюкометр имеют при диагностике сахарного диабета.

Глюкометр

При определенных состояниях в моче может содержаться гемоглобин, поэтому нередко данная биологическая жидкость и ее анализы являются важными частями диагностики различных заболеваний. Такое случается при переливании несовместимой крови от донора, в особенности у ребенка.

Методы определения количества гемоглобина в крови

Определение количества гемоглобина в крови по методу Сали

Гемоглобин (Hb) – основной дыхательный пигмент эритроцитов, относящийся к хромопротеидам и обеспечивающий ткани кислородом, состоит из белка – глобина и гема – соединения протопорфирина IX с железом. Последний придает гемоглобину характерную окраску. Присоединение к гему различных химических групп сопровождается изменением окраски. На этом основано определение концентрации гемоглобина крови.Для определения содержания Hb в крови предложено много различных методов. Наибольшее распространение получили колориметрические методы, основанные на колориметрии производных гемоглобина.

В настоящее время принят унифицированный гемиглобинцианидный метод определения количества гемоглобина. Гемоглобин окисляют в метгемоглобин (гемиглобин) железосинеродистым калием; образующийся с ацетонциангидрином окрашенный цианметгемоглобин (гемиглобинцианид) определяют колориметрически с помощью фотоэлектроколориметра, счетчика и гематологического автомата.

Наиболее распространенным в прошлом было определение количества гемоглобина по методу Сали. Этот метод чрезвычайно прост и быстро выполним, но недостаточно точен. Он основан на колориметрии солянокислого гематина. При смешивании крови с соляной кислотой Hb превращается в солянокислый гематин, имеющий коричневый цвет. Полученную смесь разбавляют дистиллированной водой до цвета раствора в стандартных пробирках, находящихся в крайних гнездах гемометра. Этот раствор имеет интенсивность окраски, соответствующую содержанию гемоглобина, равному 166,7 г/л.В норме в крови содержится около 140 г/л гемоглобина (у женщин 120-140 г/л, у мужчин 130-160 г/л, у новорожденных – 217 г/л).

1. В градуированную пробирку гемометра наливают до первой метки 0,1N раствор соляной кислоты.

2. Капиллярной пипеткой набирают кровь точно до метки 20 мм и осторожно выдувают ее на дно пробирки. Не вынимая пипетки из пробирки, промывают ее соляной кислотой, встряхивая пробирку, тщательно перемешивают ее содержимое. Для завершения реакции смеси дают постоять не менее пяти минут.

3. Специальной пипеткой прибавляют к смеси по каплям дистиллированную воду, перемешивая содержимое палочкой. Это продолжается до тех пор, пока цвет исследуемой жидкости не сравняется с окраской стандартного раствора.

4. Отмечают по шкале, на каком делении стоит уровень верхнего края мениска, полученного раствора солянокислого гематина. Если по шкале пробирки единица измерения Hb – r%, то чтобы выразить результат в СИ, умножают найденную цифру на 10.Например, Hb = 13,2 г%*10 = 132 г/л,Источниками ошибок могут быть: выцветшие стандартные растворы в старых гемометрах; неточное соблюдение пятиминутной выдержки перед началом разведения; попадание воздуха в капилляр с кровью

Определение гемоглобина в крови – методы диагностики, строение и физиология гемоглобина

Строение и физиология гемоглобина

Гемоглобин – это четвертичная глобула, которая занимается утилизацией и поставкой оксидов в организме человека. Данное пептидное соединение является тетрамером, состоящим из четырех субъединиц. Одна полипептидная структура способна переносить через кровоток до четырех молекул кислорода.

Гемоглобин состоит из простетической группы и глобулина. Простетическую группу железосодержащего пептида принято называть «гемом». Благодаря гему кровь приобретает свойственный ей окрас – алый или синевато-красный. Простетическая группа содержит железо, которое участвует в восстановительно-окислительных процессах.

Различают несколько основных видов гемоглобина:

• Оксигемоглобин;
• Карбоксигемоглобин;
• Дезоксигемоглобин;

Оксигемоглобин образуется при присоединении кислорода к гемоглобину в условиях высокого парциального давления. При отщеплении кислорода от железосодержащего белка образуется устойчивая форма – дезоксигемоглобин. Карбоксигемоглобин появляется в результате присоединения монооксида или диоксида углерода. Стоит отметить, что монооксид углерода в 250 раз эффективнее связывается с железосодержащим белком, чем обуславливается его опасность для жизни при вдыхании (угарный газ).

Дезоксигемоглобин сильно токсичен для тканей человеческого организма, поэтому существуют специальные системы «ликвидации» гемоглобина в крови. Этим занимается особое пептидное соединение – гаптоглобин.

Другой набор методов диагностики уровня гемоглобина в крови

Метод базируется на свойстве железосодержащего белка превращаться в хлорид гематита под действием соляной кислоты. Методика Сали считается неинвазивным вмешательством.

Интенсивность цвета жидкости прямо пропорциональна концентрации гемоглобина в крови. Раствор хлоргемина при проведении исследования разводят дистиллированной водой до стандартного цветового спектра.

Важно! Стоит отметить, что гемоглобин по Сали не получил широкого распространения на территории РФ.

Метод, который применяется для определения уровня гемоглобина, принято называть «гемометром Сали». Другое название современного метода определения гемоглобина по Сали – гемоглобинометрия. Такой колориметрический аппарат состоит из специального штатива, который имеет три гнезда.

Боковые гнезда держат две склянки с веществами. Среднее гнездо данного прибора необходимо для размещения пронумерованной мензурки из стекла. Градуированная мензурка обладает шкалой с делениями, которые измеряют количество железосодержащего пептидного соединения в граммах на децилитр (г/дл). При клиническом исследовании крови используется специальная пипетка для воды и размешивания содержимого склянки.

При проведении полного анализа по методу Сали вначале в склянку наливается 0.10% раствор соляной кислоты. Потом выполняется забор исследовательского материала из кончика пальца в пипетку до отметки «0.04 мл». Впоследствии пипетку обтирают стерилизованной ваткой и размещают в мензурку с раствором HCl.

Медицинский сотрудник несколько раз встряхнет содержимое пробирки и поставит отстаиваться. Полное химическое превращение железосодержащего пептидного соединения в растворе соляной кислоты происходит не менее чем за 10-15 минут.

По истечении пяти минут оценивается цвет жидкости в гемометре со стандартными цветами. Как правило, он более темный, нежели в стандартных пробирках. Используя обычную пипетку к раствору постепенно добавляют чистую воду, попеременно перемешивая содержимое и сравнивая со стандартным цветом. На окончательном этапе цвет материала должен сравняться с нормативом. После всего вышеперечисленного замеряют уровень жидкости и проводят соответствующие подсчеты.

В промышленном масштабе выпускаются гемометры, которые содержат исключительно грамм-процентную градуированную шкалу. Нормой гемоглобина у мужчин и женщин принято считать значения 15 г%, или 168 г/дл. Но даже при соблюдении определенных правил наблюдаются небольшие погрешности в измерениях. В некоторых случаях разные результаты могут в значительной мере исказить данные о болезни.

Стандартизированным и наиболее точным методом определения гемоглобина принято считать гемоглобинцианидный анализ. Такая методика базируется на свойстве железосодержащего пептидного соединения превращаться в цианметгемоглобин при добавлении к биологическому материалу определенного вещества.

Содержание цианметгемоглобина замеряют фотометрически. При анализе крови в роли реактива применяется раствор Драбкина. Железосодержащий белок под влиянием синеродисто-железистого калия превращается в метгемоглобин, который потом преобразуется в присутствии цианина калия в гемиглобинцианид.

Типичное соотношение разведения биологического материала с реагентом — 2 : 500 (0,04 миллилитров капель крови и 10 мл реактива). По истечении 30 минут, которые нужны для полного преобразования железосодержащего пептида в гемиглобинцианид, измеряют «гашение» при длине волны в 550 нанометров и плюс толщине слоя в 2 см против воды на спектрофотометре СФ или на ФЭК и ему похожей технике. С помощью СФ также измеряют уровень свободного железосодержащего пептида в плазме.

На данный момент разработаны гемиглобинцианидные цветовые стандарты в ампулах, которые точно соответствуют определенному уровню железосодержащего белка. Растворы, полученные в результате определенных реакций, исследуют с помощью колориметрии. После всего рисуют рабочие таблицы и узнают, какое количество железосодержащего пептидного соединения содержится в кровотоке.

Есть устройства, специально созданные для определения количества гемоглобина. Зачастую используются именно циангемоглобиновые методы определения гемоглобина. Как правило, гемоглобинометрические приборы могут работать самостоятельно. Широкое применение такие тест-устройства для определения гемоглобина в крови получили в домашних условиях. Однако в ряде ситуаций больные не учитывают влияние внешних факторов в доме (стресса, еды).

Значительную известность и распространение среди различных лабораторий получила методика гемихром (или гемихромный метод). Принцип данного метода основан на преобразовании всех форм железосодержащего пептида в гемихром, который имеет красноватый цвет. Преимущество гемихромного метода заключается в том, что он не является токсичным.

Иногда назначают прохождение биохимического исследования на гликированный гемоглобин. Стоит отметить, что важное значение гликозилированный гемоглобин и глюкометр имеют при диагностике сахарного диабета.

При определенных состояниях в моче может содержаться гемоглобин, поэтому нередко данная биологическая жидкость и ее анализы являются важными частями диагностики различных заболеваний. Такое случается при переливании несовместимой крови от донора, в особенности у ребенка.

Методы определения гемоглобина в крови: какой подсчет практичнее?

Гемоглобин (Hb) – молекула, с помощью которой переносится кислород. Она расположена внутри зрелых эритроцитов, лишенных ядер. Клетки получают кислород из альвеол легких, переносят его органам к клеткам-мишеням. От них получают углекислый газ, и переносят его обратно в легочную систему. Без этого действия невозможна жизнь человека. Существуют различные состояния, при которых гемоглобин может повышаться или снижаться. Для диагностики используют различные лабораторные методы определения функции соединения гемоглобина. Их подбирает врач индивидуально для каждого пациента.

Клиническое значение определения гемоглобина

У взрослого человека норма концентрации Hb зависит от пола:

• женщины 11-14г/% или 110-140 г/л;
• мужчины 12-16 г/% или 120-160 г/л.

Для мужчин норма более завышена, так как они имеют большую мышечную массу, по сравнению с женщинами.

Снижение концентрации гемоглобина наблюдается при следующих состояниях и заболеваниях:

• сниженная концентрация эритроцитов в следствии железодефицитной, серповидно-клеточной анемии;
• недостаточное количество веществ, которые влияют на продукцию эритроцитов (фолиевая кислота, витамин B12);
• заболевание красного костного мозга.

Повышенная концентрация Hb наблюдается при следующих состояниях и заболеваниях:

• повышенная продукция эритроцитов при заболевании красного костного мозга, злокачественных новообразованиях;
• компенсаторное повышение количества эритроцитов вследствие сердечно-сосудистых и легочных заболеваний;
• снижение количества плазмы крови вследствие чего число форменных элементов повышается в 1 л биологической жидкости.

Гемоглобин появляется в эритроцитах после утраты ядра и приобретении зрелости клетки. Местом утилизации красных кровяных клеток и Hb является селезенка. Жизненный цикл 1 клетки совместно составляет 120 дней. После гибели в кровь выделяется железо, которое поставляется в красный костный мозг. С помощью этого элемента продуцируются новые красные кровяные тельца.

Методы измерения гемоглобина в крови

Существуют следующие методы анализа гемоглобина в биологической жидкости:

После использования соответствующей методики чаще всего применяют полуавтоматический анализатор, который измеряет спектр длины волны молекулы Hb.

Подсчет показателей осуществляется не только в крови, но и в моче, так как в мочевыделительной системе возможны небольшие или значительные кровотечения.

Полуавтоматический гематологический анализатор полностью исключают реставрации врачебные ошибки в отчете необходимого значения. Но прибор не сможет увидеть и распознать нарушение различных параметров.

Ручной подсчет основывается на применении реактива и биологической жидкости. Метод не подсчитывает число клеток, а определяется их присутствие или отсутствие. Подходит для мочи

Унифицированные методы определения гемоглобина

Унифицированная методика – способы измерения показателей, применяемые в большинстве лаборатории. Являются точными, быстрыми, практичными. Для Hb это гемицианидный метод с фотоколориметрическим подсчетом. Позволяет выявить точное количество показателя с помощью подсчета длины волны на специализированном полуавтоматическом приборе.

Второй унифицированной методикой является гимехромный способ. Его принцип тот же, но используются более качественные реактивы, которые не приносят вреда здоровью врачей.

Гемиглобинцианидный метод определения гемоглобина в крови

У гемоглобина имеется множество форм, поэтому рассчитать длину его волны очень сложно. Для упрощения подсчета применяют специализированные химические вещества, которые переводит его в метгемоглобин.

Для получения точных результатов необходимо использовать трансформирующий раствор, специализированные измерительные пробирки, фотоэлектроколориметр. Hb имеет длину волны 540 м. Именно в таком пределе прибор подсчитывает заданный показатель.

Полученные данные подставляют в формулу, которая переводит общее количество показатели в граммы на литры (г/л).

Важно! На данный момент метод определения концентрации гемоглобина в крови используется редко, так как применяемые реактивы опасны для жизни и здоровья в врачей-лаборантов. При нарушении правил приготовления могут возникнуть ожоги кожных покровов и слизистых оболочек.

Читай подробно о гемиглобинцианидном методе в отдельной статье!

Гемихромный метод определения гемоглобина в крови

С помощью методики Hb переводится в циангемоглобин с помощью реактивов, которые полностью безопасны для человека. Для этого используют цианистые соединения (натрий додецилсульфат, лаурилсульфат).

Образуется гемихром, который подсчитывается при длине волны 540 нм. Полученные данные подставляют в формулу для перевода показателя в г/л.

Цианидный метод исследования гемоглобина в крови

Для проведения анализа используют капиллярную и венозную кровь. В биологическую жидкость человека добавляют трансформирующий раствор. С помощью него происходит преобразование всех форм Hb в метгемоглобин.

В пробирку наливают 5 мл реагента и 20 мкл биологической жидкости. Выжидают 10 минут, пока произойдет реакция. Полученную жидкость заливают в специальную кювету, фотоэлектроколориметр пропускает через нее лучи, подсчитывает элементы в области длины волны, равной 543 нм. Содержание Hb рассчитывается по формуле с помощью полученных показателей.

Метод Сали для определения гемоглобина в крови

Определение количества гемоглобина по методу Сали редко применяется в клинических учреждениях, так как существуют более совершенные способы.

Получают биологическую жидкость человека, в которую добавляют хлористоводородная кислоту. Раствор тщательно перемешивают. Это позволяет Hb перейти в другую форму – солянокислый гематин. Добавляют дистиллированную воду до тех пор, пока окрашивание не будет идентичным с контрольной пробиркой (коричневый цвет).

На нижнем мениске пробирки будет стоять цифра, которая указывает на содержание показателя в 100 г крови. Для вычисления концентрации в 1 литре, показатели умножают на 10. Процентное содержание Hb вычисляется с помощью пропорции:

• А%=Х
• Х=А×100/16,7
• Х – определяемый показатель,
• А – полученное число гемоглобина с помощью гемометра,
• 16,7 – процентное количество гемоглобина в контрольной пробе.

Метод спектрального анализа для измерения гемоглобина

Наиболее точным методом определения гемоглобина является использование спектрофотометра. Он определяет только 1 из форм гемоглобина, улавливая длину его волны. В крови человека существуют различные формы Hb:

• Оксигемоглобин;
• Дезоксигемоглобин;
• Карбоксигемоглобин;
• Метгемоглобин.

Для исследования с помощью спектрофотометра необходим перевод показателей только в 1 из форм. Для этого применяют различные реактивы. Показатель окрашивается определенным цветом (красный, зеленый). Его длину волны улавливает прибор, подсчитывает все элементы в заданной траектории.

Аммиачный метод определения гемоглобина

Аммиачный метод количественного определения гемоглобина соответствует предыдущим способам. Разницу составляет использование аммиака в концентрации 0,04%. Проба должна настояться, чтобы произошла реакция перехода всех форм Hb в одну. Ее рассчитывают с помощью полуавтоматического анализатора в виде спектрофотометра. Раствор помещают в кювету, устанавливают в прибор. Рассчитывают показатель на длине волны 543 нанометров.

Методы определения гемоглобина в моче

Существует 4 разновидности исследования мочи. Каждая из них отличается применяемыми реактивами. Для исследования собирают только свежую порцию урины. Если она настоится, Hb превратиться в медгемоглобин, Поэтому реакция будет невозможна. Урину подготавливают. Для этого к ней добавляет 2 мл уксусной кислоты и 5 мл диэтилового эфира.

• Реакция с гваяковой кислотой. Разводят щепотку кислоты, добавляют 3 мл этанола 96%. Добавляют 8-10 капель получившейся жидкости к 8-10 каплям разведенной урины. Если Hb присутствует в образце, он окрашивается в синий цвет.
• Реакция с амидопирином. К 2-3 мл разведенной урины добавляют 10 капель раствора амидопирина и 10 капель 3% перекиси водорода. Если Hb присутствует, урина окрашивается в фиолетовый цвет.
• Реакция с бензидином. В пробирку добавляют 6 капель бензидина, 6 капель 3% перекиси водорода,4 капли чистой урины. Если Hb присутствует, получившаяся жидкость окрашивается в зеленый цвет.
• Использование тест-полосок, таблеток. Они содержат специализированные реактивы в готовом виде. Полоски опускают в мочу, достают, оценивают цветовую шкалу. Таблетки полностью растворяют в биологической жидкости человека. Индикаторная шкала подписана на упаковке.

Какой метод определения гемоглобина наиболее точный?

Наиболее точным методом определения показателя считается фотоколориметрический с использованием гемихромного разведения. С помощью него снижается риск врачебной ошибки. Прибор автоматически подсчитывает показатель. Здесь важно правильно подготовить приборы, пробирки, кюветы, настроить аппарат. Методика безопасна для лаборанта.

В определении Hb в моче наиболее информативным является использование тест-полосок. Здесь полностью исключается риск неправильного разведения реактивов.

Определение гемоглобина является важным информативным тестом. Можно определить кровотечение в мочевыводящих путях, состояние сердечно-сосудистой и легочной системы. С помощью методов вовремя выявляются различные виды анемии при низких концентрациях гемоглобина. После получения данных рекомендуется обратиться к лечащему врачу. Он расшифрует полученный результат, выявит нормы и отклонения, назначит лечение.

Екатерина Беликова, врач лабораторной диагностики, специально для Mirmam.pro

Методы определения количества гемоглобина в крови

Определение количества гемоглобина в крови по методу Сали

Гемоглобин (Hb) – основной дыхательный пигмент эритроцитов, относящийся к хромопротеидам и обеспечивающий ткани кислородом, состоит из белка – глобина и гема – соединения протопорфирина IX с железом. Последний придает гемоглобину характерную окраску. Присоединение к гему различных химических групп сопровождается изменением окраски. На этом основано определение концентрации гемоглобина крови.Для определения содержания Hb в крови предложено много различных методов. Наибольшее распространение получили колориметрические методы, основанные на колориметрии производных гемоглобина.

В настоящее время принят унифицированный гемиглобинцианидный метод определения количества гемоглобина. Гемоглобин окисляют в метгемоглобин (гемиглобин) железосинеродистым калием; образующийся с ацетонциангидрином окрашенный цианметгемоглобин (гемиглобинцианид) определяют колориметрически с помощью фотоэлектроколориметра, счетчика и гематологического автомата.

Наиболее распространенным в прошлом было определение количества гемоглобина по методу Сали. Этот метод чрезвычайно прост и быстро выполним, но недостаточно точен. Он основан на колориметрии солянокислого гематина. При смешивании крови с соляной кислотой Hb превращается в солянокислый гематин, имеющий коричневый цвет. Полученную смесь разбавляют дистиллированной водой до цвета раствора в стандартных пробирках, находящихся в крайних гнездах гемометра. Этот раствор имеет интенсивность окраски, соответствующую содержанию гемоглобина, равному 166,7 г/л.В норме в крови содержится около 140 г/л гемоглобина (у женщин 120-140 г/л, у мужчин 130-160 г/л, у новорожденных – 217 г/л).

1. В градуированную пробирку гемометра наливают до первой метки 0,1N раствор соляной кислоты.

2. Капиллярной пипеткой набирают кровь точно до метки 20 мм и осторожно выдувают ее на дно пробирки. Не вынимая пипетки из пробирки, промывают ее соляной кислотой, встряхивая пробирку, тщательно перемешивают ее содержимое. Для завершения реакции смеси дают постоять не менее пяти минут.

3. Специальной пипеткой прибавляют к смеси по каплям дистиллированную воду, перемешивая содержимое палочкой. Это продолжается до тех пор, пока цвет исследуемой жидкости не сравняется с окраской стандартного раствора.

4. Отмечают по шкале, на каком делении стоит уровень верхнего края мениска, полученного раствора солянокислого гематина. Если по шкале пробирки единица измерения Hb – r%, то чтобы выразить результат в СИ, умножают найденную цифру на 10.Например, Hb = 13,2 г%*10 = 132 г/л,Источниками ошибок могут быть: выцветшие стандартные растворы в старых гемометрах; неточное соблюдение пятиминутной выдержки перед началом разведения; попадание воздуха в капилляр с кровью

Клиническое значение гемоглобина крови

Методы определения концентрации гемоглобина в крови

Для определения концентрации гемоглобина в крови используются:

– унифицированный гемиглобинцианидный метод;

– гемихромный метод – новый колориметрический метод, не содержащий в составе реагентов ядовитых цианистых соединений;

Распространенный в прошлом метод определения гемоглобина по Сали недостаточно точный и в настоящее время не применяется.

Определение концентрации гемоглобина крови унифицированным гемиглобинцианидным методом

Принцип. Гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием (красной кровяной солью) окисляется в метгемоглобин (гемиглобин), образующий с ацетонциангидрином соединение красного цвета – гемиглобинцианид, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина.

1. Трансформирующий раствор: ацетонциангидрин – 0,5мг; калий железосинеродистый – 0,2г; натрия гидрокарбонат – 1,0г; дистиллированная вода – до 1л. Раствор стабилен при комнатной температуре в течение нескольких месяцев при хранении в посуде из темного стекла. При обесцвечивании и появлении осадка непригоден.

2. Калибровочный раствор гемиглобинцианида – для построения калибровочного графика (при использовании ФЭКа). В настоящее время для определения гемоглобина крови в большинстве клинико-диагностических лабораторий пользуются готовыми наборами реактивов, выпускаемыми рядом фирм.

Специальное оборудование: ФЭК или МИНИГЕМ-540.

Ход определения. В пробирку с помощью градуированной пипетки или автоматического дозатора наливают точно 5мл трансформирующего раствора и вносят в него 0,02мл (капилляр Сали) крови, промывая капилляр 2-3 раза трансформирующим раствором. Тщательно перемешивают содержимое пробирки. При этом получается разведение крови в 251 раз. Колориметрируют содержимое пробирки через 20 минут на МИНИГЕМе-540 или на ФЭКе при условиях: светофильтр зеленый (длина волны 520-560 нм), кювета 10мм; против трансформирующего раствора. При использовании ФЭКа содержание гемоглобина определяют по калибровочному графику.

Нормальное содержание гемоглобина в крови:у мужчин 130-160 г/л; у женщин 120-140 г/л.

Снижение концентрации гемоглобина в крови является основным лабораторным признаком анемии. Умеренное снижение содержания гемоглобина чаще бывает при железодефицитных анемиях, а значительное снижение характерно для острой кровопотери, гипопластической и В₁₂-дефицитной анемий. Однако для диагностики анемии не достаточно выявления снижения концентрации гемоглобина – это только устанавливает факт наличия анемии. Для уточнения характера анемии требуются дополнительные исследования (определение количества эритроцитов, их морфологии, расчетных эритроцитарных индексов, количества ретикулоцитов и др.).

Повышение содержания гемоглобина обычно сочетается с увеличением количества эритроцитов в крови и характерно для эритремии. Физиологическое повышение концентрации гемоглобина наблюдается у новорожденных.

1.3.4. Контрольные вопросы по теме «Определение концентрации гемоглобина в крови»

1. Какие исследования входят в общий анализ крови?

2. В каких случаях проводят укороченный анализ крови?

3. Какие документы регламентируют правила безопасной работы с биологическим материалом в КДЛ?

4. Основные правила безопасной работы с кровью.

5. Основная функция гемоглобина.

6. Чем строение гемоглобина взрослых отличается от гемоглобина плода?

7. Почему патологические соединения гемоглобина не могут выполнять дыхательную функцию?

8. Причины образования карбоксигемоглобина.

9. Методы определения концентрации гемоглобина в крови.

10. Диагностическое значение гемоглобина крови.

Дата добавления: 2014-11-29 ; Просмотров: 3095 ; Нарушение авторских прав? ;

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет