Осмотическая резистентность эритроцитов: что это такое, определение, стойкость, норма, устойчивость

Осмотическая резистентность эритроцитов: что это такое, определение, стойкость, норма, устойчивость

Проведено исследование изменения количественных и качественных показателей эритроцитов при действии естественных (старение) и индуцированных (наркомания, экзаменационный стресс) стрессовых факторов. Для определения качественных изменений эритроцитарных мембран проведен анализ кислотной и осмотической устойчивости красных клеток крови к стрессу. Наиболее значительные изменения количественных показателей крови отмечены у наркозависимых. Сходное, но менее выраженное понижение содержания эритроцитов и гемоглобина наблюдается при старении. При стрессе, напротив, обнаружено повышение компонентов красной крови. Кислотные эритрограммы в рассматриваемых группах отличаются от нормальной эритрограммы левым сдвигом и повышением числа гемолизированных эритроцитов на пике эритрограммы, а также уменьшением продолжительности эритрограммы. При действии убывающих концентраций NaCI наиболее значительное изменение осмотической стойкости эритроцитов отмечено при наркозависимости. Показано, что при действии стрессовых факторов различного генеза выявляются общие механизмы, выражающиеся в снижении параметров кислотной и осмотической устойчивости эритроцитов. Специфика влияния стрессовых факторов (наркотики, старение, учебная нагрузка) выражается в различной степени выраженности эффекта их действия.

1. Мамаджакин У.Ч. Гематологические заболевания, особенности клеток периферической крови и костного мозга у мужчин, проживающих в районе захоронения радиоактивных отходов: автореферат дисс. . канд. мед. наук / У.Ч. Мамаджакин. – Бишкек, 2006. – 22 с.

3. Сахау Н. Р. Состояние эритроцитарных мембран и оценка эффективности антиоксидантной терапии при хроническом пиелонефрите: автореферат дисс. . канд. мед. наук / Н.Р. Сахау. – Уфа, 2006. – 21 с.

4. Тонких Т.В. Исследование влияния норсульфазола натрия на гемолитическую и кислотную резистентность эритроцитов донорской крови / Т.В. Тонких, И.А. Лавриненко, С.Г. Резван [и др.] // Вестник ВГУ. – 2005. – № 1. – С.152-155. 5. Эллард К. Анемия: причины и следствия / под ред. Абдулкадырова К. М. / К. Эллард. – М.: Изд-во «Норинт», 2002. – 64 с.

Введение

Проблема адаптации живых организмов к непрерывно изменяющимся условиям окружающей их среды является актуальной среди специалистов медико-биологического профиля. Ключевым звеном в теории адаптации выступает концепция стресса, созданная Г. Селье. По современным представлениям, стресс (у человека) – это типовой патологический процесс, в основе которого лежит сложившаяся в ходе эволюции стандартная неспецифическая генерализованная приспособительная реакция целостного организма на воздействие сверхсильного раздражителя или его угрозу. Процесс адаптации универсален, и, несмотря на многообразие нозологических форм, существуют общие механизмы изменения свойств эритроцитов при стрессе любого происхождения.

В связи с этим для исследования специфики ответной реакции организма на стрессовые воздействия различного генеза нами была изучена кислотная и осмотическая устойчивость эритроцитов при действии токсических веществ (наркотики), естественных факторов (старение) и интенсивной учебной нагрузки.

В исследованиях приняли участие по 10 человек каждой группы, у которых прокалыванием пальца брали кровь. В крови определяли количественные (содержание эритроцитов, гемоглобин, цветовой показатель, СОЭ) и качественные (кислотная и осмотическая устойчивость) показатели. Результаты подвергли статистической обработке методом малой выборки и сравнительному анализу по отношению к контрольной группе.

Сравнение кислотных эритрограмм при старении, стрессе и наркомании проводили по следующим показателям: время продолжительности гемолиза эритроцитов, ширина интервала доминирующей группы эритроцитов в эритроцитарной популяции, время гемолиза максимального количества эритроцитов.

Таблица 1

Показатели кислотной резистентности эритроцитов у больных героиновой наркоманией, при стрессе и старении (M±m, n = 40)

Время начала гемолиза (мин)

Время окончания гемолиза (мин)

Пик кислотной эритрограммы

Ширина основания эритрограммы

Здесь и далее: Р – степень достоверности результатов по отношению к контролю.

Продолжительность кислотной эритрограммы здоровых лиц составляет 8 мин. Эритрограмма имеет одну вершину, что указывает на относительную однородность эритроцитарной популяции, соответствующей нормобластическому типу кроветворения. Размах основания пика эритрограммы составляет 4 мин. Вершина эритрограммы приходится на 3 мин. В этой точке гемолизу подвергается около 19,1 % эритроцитов. В интервале 3-6 мин гемолизируются 40 % эритроцитов. Правое крыло эритрограммы растянуто и указывает на присутствие в эритроцитарной популяции молодых эритроцитов с высокой кислотной стойкостью. Доля эритроцитов с минимальной стойкостью в интервале 2-3 мин составляет 24,1 %, эритроциты со средней стойкостью в интервале 3,5-4,5 мин составляют 48,0 % и максимальной стойкостью в интервале от 5,0 до 7,5 мин – 11,3 %.

На эритрограмме лиц старческого возраста наблюдается левый сдвиг одновершинной эритрограммы со смещением максимума ко 2 мин. К этому времени гемолизу подвергаются около 38 % эритроцитов. Размах основания эритрограммы составляет 4,5 мин. За это время гемолизу подвергается 86 % эритроцитов. Время полного гемолиза эритроцитов стариков значительно сокращено: уже на 5 мин. все эритроциты подвергаются разрушению.

Начальные участки эритрограммы характеризуют предгемолизные изменения эритроцитов в связи с переходом их в сферическую форму.

Продолжительность кислотной эритрограммы студентов в состоянии стресса составляет 8 мин. Эритрограмма имеет одну вершину, что указывает на относительную однородность эритроцитарной популяции, соответствующей нормобластическому типу кроветворения. Размах основания пика эритрограммы составляет 1 мин. Вершина эритрограммы у городских студентов приходится на 2,5 мин. В этой точке гемолизу подвергается около 34,6 % эритроцитов. Доля эритроцитов с минимальной стойкостью в интервале 2-3 мин составляет у студентов 43,0 %, эритроциты со средней стойкостью в интервале 3,5-4,5 мин составляют 8,1 % и максимальной стойкостью в интервале от 5,0 до 7,5 мин – 24,1 %.

Эритрограмма героиновых наркоманов отличается от эритрограммы здоровых лиц и характеризует изменения в эритроцитарной популяции.

Наблюдается сдвиг эритрограммы влево со смещением максимума к 2,5 мин. К этому времени гемолизируют 31,5 % эритроцитов.

Доля эритроцитов с низкой стойкостью, подвергшихся гемолизу в интервале 2-3 мин, составила 69,4 %. Среднестойкие эритроциты гемолизировали в интервале 3,5-4,5 мин и составили 26,7 %. Максимально стойкие эритроциты (более 2,0 %) гемолизировали в интервале от 5,0 до 7,5 мин (таб. 1).

Смещение пика эритрограммы влево и уменьшение ширины его основания обнаружено также при различных патологических состояниях, что указывает на неспецифический характер изменений [4,1,3].

Отмеченные изменения связывают со структурной перестройкой мембраны эритроцитов, вследствие нарушения клеточного метаболизма и снижением устойчивости клеток эритроцитарного ряда к гемолизу [3].

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о качественных изменениях состава эритроцитарной популяции героиновых наркоманов в состоянии абстиненции. Интенсивность и общая продолжительность кислотного гемолиза эритроцитов, а также соотношение низко- и высокостойких эритроцитов отличаются от контрольной группы. Преобладание в популяции эритроцитов с низкой кислотной резистентностью указывает на значительное ее постарение, которое, очевидно, связано с деструктивными процессами эритроцитарных мембран.

Мембрана эритроцитов подвергается деструктивным изменениям при действии не только кислотных гемолитиков, но и осмотических.

Измерение осмотической устойчивости эритроцитов является важным методом исследования не только на опытах invitro, но и методом диагностики в медицине и используется для изучения механизма патологических процессов и действия некоторых лекарств и биологически активных соединений.

В результате наших исследований были обнаружены специфические особенности осмотической резистентности эритроцитов при действии токсических веществ, а также старении организма.

Так, при физиологической норме действие убывающих концентраций растворов NaCI (0,5; 0,46; 0,4 %) приводит к снижению количества эритроцитов на 20,8; 32,0 и 58,6 % соответственно по сравнению с действием 3х-процентного раствора. При старении содержание эритроцитов снижается в 3х-процентном растворе до 3,72×10 12 /л, в 0,5 % растворе происходят незначительные изменения. При концентрации NaCl 0,46 % наблюдается резкое снижение количества эритроцитов до 0,114×10 12 /л. По сравнению с физиологической нормой у наркоманов наблюдается снижение количества эритроцитов при концентрации раствора 3 % на 44,8 %, при 0,5 % – на 59,8, при 0,46 % – на 90,6 и при 0,4 % – на 89,7 % (табл. 2).

Таблица 2

Показатели осмотической резистентности при различных состояниях организма

Определение осмотической резистентности эритроцитов (Osmotic fragility (OF) test, RBC)

Синонимы: Анализ крови на осмотическую резистентность эритроцитов; Осмотическая резистентность эритроцитов (ОРЭ); Осмотическая стойкость эритроцитов.

Osmotic fragility test (OFT); Osmotic fragility of red blood cells; Red blood cell osmotic fragility test.

Краткая характеристика теста на Осмотическую резистентность эритроцитов

Тест на осмотическую резистентность эритроцитов заключается в измерении их устойчивости к гемолизу при воздействии солевых растворов разной концентрации. Когда эритроциты попадают в гипотоническую среду, вода по осмотическому градиенту устремляется в клетки, что может приводить к разрушению и лизису (гемолизу) эритроцитов. Осмотическая устойчивость характеризует способность эритроцитов принимать воду без лизиса клетки, она зависит, в частности, от соотношения площади поверхности к объему клетки.

С какой целью исследуют Осмотическую резистентность эритроцитов

Оценка осмотической резистентности эритроцитов – классический тест, используемый в диагностике наследственного сфероцитоза. Наследственный сфероцитоз – гетерогенная группа наследственных гемолитических анемий, развивающихся вследствие генетических дефектов, которые приводят к дефекту или дисфункции белков мембраны и цитоскелета эритроцитов, в результате чего эритроциты приобретают характерную сферическую форму. Это приводят к ускоренному разрушению эритроцитов в селезенке и укорочению их срока жизни. Сфероциты являются осмотически менее стойкими клетками, которые легче лизируются в гипотоническом растворе, по сравнению с нормальными эритроцитами. Заболевание проявляется гемолитической анемией различной степени выраженности, спленомегалией, желтухой. В крови наблюдается обычно микроцитарная нормохромная анемия, ретикулоцитоз. Гемолитические кризы могут возникать при инфекциях или интоксикациях. Другим частным осложнением субклинического сфероцитоза является желчнокаменная болезнь, возникающая в раннем возрасте, которая может быть одним из показаний для обследования пациентов. Нормальная осмотическая резистентность эритроцитов не исключает диагноз наследственного сфероцитоза и может отмечаться у 10-20% таких пациентов, осмотическая стойкость может быть нормальной при сочетании с дефицитом железа, обтурационной желтухой, в фазе восстановления после апластического криза (когда увеличено число ретикулоцитов).

Напротив, повышенная осмотическая стойкость эритроцитов указывает на наличие сплющенных эритроцитов (лептоцитов), в таких клетках снижено соотношение площади поверхности к объему. Подобные изменения наблюдаются при железодефицитной анемии, талассемии и серповидноклеточной анемии, так как эритроциты с низким содержанием гемоглобина (эритроцитарный индекс MCH) и низким средним объемом клеток (эритроцитарный индекс MCV) необычайно устойчивы к осмотическому лизису.

Что может повлиять на результат оценки Осмотической резистентности эритроцитов

Осмотически более устойчивы ретикулоциты и эритроциты у пациентов после спленэктомии. При заболеваниях печени, вследствие пассивного накопления липидов, эритроциты также проявляют относительно большую резистентность к осмотическому лизису.

Правила подготовки к Определению осмотической резистентности эритроцитов

Специальной подготовки не требуется. Рекомендуется проводить взятие крови не ранее, чем через 4 часа после последнего приема пищи.

В каких случаях проводят Определение осмотической резистентности эритроцитов:

• дифференциальная диагностика гемолитических анемий;
• подтверждение наследственного сфероцитоза;
• желчнокаменная болезнь в раннем возрасте;
• гиперспленизм и спленомегалия.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Осмотическая стойкость эритроцитов

* На сайте указан максимально возможный срок выполнения исследования. Он отражает время выполнения исследования в лаборатории и не включает время на доставку биоматериала до лаборатории. Приведенная информация носит справочный характер и не является публичной офертой. Для получения актуальной информации обратитесь в медицинский центр Исполнителя или call-центр.

Описание

Под осмотической резистентностью эритроцитов понимается их устойчивость по отношению к гипотоническим растворам натрия хлорида. Минимальная резистентность эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического раствора натрия хлорида (в серии растворов с постепенно уменьшающейся концентрацией), при которой начинается гемолиз наименее устойчивых эритроцитов, находящихся в растворе в течение 3 ч; максимальная — минимальной концентрацией гипотонического раствора натрия хлорида, вызывающего в течение 3 ч гемолиз всех эритроцитов крови, помещенных в этот раствор. Под минимальной осмотической резистентностью эритроцитов понимают максимальную концентрацию гипотонического раствора натрия хлорида, при которой начинается гемолиз наименее устойчивых эритроцитов, которые находятся в растворе 3 часа. Под максимальной осмотической резистентостью эритроцитов понимают минимальную концентрацию гипотонического раствора хлорида натрия, вызывающего в течение 3 часов гемолиз всех эритроцитов, помещенных в раствор. Максимальная осмотическая резистентность ниже 0,32 % возможна после больших кровопотерь и спленэктомии, при гемоглобинозе С, застойных желтухах, а также в некоторых случаях полицитемии. Повышение осмотической резистентности эритроцитов ниже 0,32 % характерно для талассемии и гемоглобинопатии. Минимальная осмотическая резистентность выше 0,48 % наблюдается при семейной гемолитической анемии, гемолитической анемии новорожденных и отравлении свинцом. Можно обнаружить небольшие изменения и при токсикозах, бронхопневмониях, туберкулезе, малярии, лейкемии, миелосклерозах, лимфогранулематозе, циррозе печени. Случаи расширения границ осмотической резистентности (одновременное понижение минимальной и повышение максимальной Сниженная осмотическая стойкость эритроцитов в гипотонических растворах свидетельствует об структурных дефектах мембраны эритроцита, обусловленных генами мембранных белков. В отличии от сфероцитоза при гемоглобинопатиях (талласемии и S-гемоглобинопатии) возникает относительный избыток мембраны, что ведет к увеличению осмотической стойкости клеток для гипотонического лизиса, поэтому тест позволяет проводить дифф.диагноз между наиболее частыми причинами наследственных гемолитических анемий.

Показания к назначению

Поводом для обследования будет соответствующая клиническая картина. Специфических симптомов, которые будут характерны только отклонению от нормы резистентности нет. Может присутствовать симптоматика такого характера: бледность кожных покровов; снижение веса без видимой причины;повышенная утомляемость и нарастающая слабость, что будет больше похоже на синдром хронической усталости; плохой аппетит; сонливость; обострение хронических заболеваний. При наличии клинической картины нужно обращаться к врачу. Первоначально это врач общей практики, то есть терапевт. Далее обследованием занимаются гематолог и смежные специалисты. Если диагностически будет установлено, что показатели ниже или выше допустимых, в обязательном порядке нужно проходить лечение, так как большая часть этиологических факторов представляет опасность не только для здоровья, но и для жизни пациента.

Интерпретация результатов/Информация для специалистов

Единицы измерения – %. Референсные значения: Осмотический лизис эритроцитов при концентрации NaCl 0,5 г/дл 3-53%, осмотический лизис эритроцитов при концентрации NaCl 0,6 г/дл (после инкубации при +37 ºC) 14-74% , осмотический лизис эритроцитов при концентрации NaCl 0,65 г/дл (после инкубации при +37 ºC) 4-40% , осмотический лизис эритроцитов при концентрации NaCl 0,75 г/дл (после инкубации при +37 ºC) 1-11%. Причины максимальной осмотической резистентности эритроцитов ниже 0,32%: массивные кровопотери; спленэктомия; гемоглобиноз С; застойная желтуха; некоторые случаи полицитемии; талассемия; гемоглобинопатия. Причины минимальной осмотической резистентности эритроцитов выше 0,48%: семейная гемолитическая анемия; гемолитическая анемия новорожденных; отравление свинцом. Расширение границ осмотической резистентности эритроцитов наблюдается в начале острого гемолитического криза, в остром периоде пернициозной анемии.

Осмотическая резистентность эритроцитов

Нормальная максимальная осмотическая резистентность эритроцитов составляет 0,34— 0,32 %, а минимальная — 0,48—0,46 %.

Под осмотической резистентностью эритроцитов понимается их устойчивость по от­ношению к гипотоническим растворам натрия хлорида. Минимальная резистентность

эритроцитов определяется максимальной концентрацией гипотонического раствора натрия хлорида (в серии растворов с постепенно уменьшающейся концентрацией), при которой начинается гемолиз наименее устойчивых эритроцитов, находящихся в растворе в течение 3 ч; максимальная — минимальной концентрацией гипотонического раствора натрия хло­рида, вызывающего в течение 3 ч гемолиз всех эритроцитов крови, помещенных в этот раствор.

Максимальная осмотическая резистентность ниже 0,32 % возможна после больших кро-вопотерь и спленэктомии, при гемоглобинозе С, застойных желтухах, а также в некоторых случаях полицитемии. Повышение осмотической резистентности эритроцитов ниже 0,32 % характерно для талассемии и гемоглобинопатии.

Минимальная осмотическая резистентность выше 0,48 % наблюдается при семейной ге­молитической анемии, гемолитической анемии новорожденных и отравлении свинцом. Можно обнаружить небольшие изменения и при токсикозах, бронхопневмониях, туберкуле­зе, малярии, лейкемии, миелосклерозах, лимфогранулематозе, циррозе печени. Случаи рас­ширения границ осмотической резистентности (одновременное понижение минимальной и повышение максимальной резистентности) наблюдаются в начале острого гемолитического криза и в остром периоде пернициозной анемии.

Кислотная резистентность эритроцитов (проба Хема)

В норме проба Хема отрицательная.

Кислотную резистентность определяют на основании различной кислотоустойчивости эритроцитов по отношению к НС1.

При анемии Маркиафавы и некоторых других гемолитических анемиях в подкисленной пробирке по сравнению с контролем обнаруживают ясный гемолиз.

Серповидные эритроциты в крови

В норме проба на серповидность эритроцитов отрицательная.

Пробу применяют для диагностики гемоглобинопатии. Гемоглобин S при понижении парциального давления кислорода кристаллизуется в форме тактоидов и придает эритроцитам форму серпа. Среди гемоглобинопатии чаще всего встречается серповидно-клеточная анемия, поэтому выявление эритроцитов в виде серпа позволяет установить этот вид анемии.

Эритроцитометрия

Эритроцитометрия — измерение диаметра эритроцитов. В процентном отношении диа­метры эритроцитов у здоровых людей распределяются следующим образом: 5 мкм — 0,4 % всех эритроцитов; 6 мкм — 4 %; 7 мкм — 39 %; 8 мкм — 54 %; 9 мкм — 2,5 %. Графическое изображение соотношения содержания в крови эритроцитов с различными диаметрами на­зывают эритроцитометрической кривой Прайс-Джонса, где по оси абсцисс откладывают ве­личину диаметра эритроцитов (мкм), а по оси ординат — проценты эритроцитов соответст­вующей величины. В норме эритроцитометрическая кривая имеет правильную, с довольно узким основанием, почти симметричную форму (рис. 1.1).

Результаты эритроцитометрии важны для уточнения характера анемии. При железоде-фицитной анемии, как правило, возможны микроцитоз эритроцитов до 30—50 % всех эрит­роцитов и соответственно сдвиг эритроцитометрической кривой влево. Увеличение процен­та микроцитов наблюдается также при наследственном микросфероцитозе, талассемии, свинцовом отравлении. При микроцитозе и сфероцитозе эритроцитометрическая кривая растянута и неправильна, сдвинута влево, в сторону меньших диаметров.

Увеличение числа макроцитов является признаком макроцитарной анемии, наблюдаю­щейся при В,₂-дефицитных и фолиеводефицитных состояниях, при которых их содержание может достигать 50 % и более, при этом в небольшом числе (1—3 %) находят и мегалоциты (эритроциты с диаметром 12 мкм и более). При этих формах анемии эритроцитометрическая кривая имеет неправильную пологую форму с широким основанием и сдвинута вправо, т.е. в сторону больших диаметров. Макроцитоз эритроцитов может наблюдаться независимо от анемии при алкоголизме, диффузных поражениях печени.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Рис. 1.1. Эритроцитометрическая кривая Прайс-Джонса в норме.

Гистограмма распределения эритроцитов по объему, получаемая с помощью современ­ных гематологических анализаторов, по сравнению с такой же по диаметру (кривая Прайс-Джонса) имеет ряд особенностей [Титов В.Н., Наумова И.Н., 1995]. Коэффициент вариации в 3 раза выше при определении объема, чем при определении диаметра. Если кривая распре­деления диаметров эритроцитов симметрична, то распределение клеток по объему будет иметь сдвиг вправо, пропорционально коэффициенту вариации. Если кривая распределения диаметров полимодальна (имеет несколько пиков), то гистограмма распределения эритроци­тов по объему может оказаться унимодальной (одновариантной), что является недостатком автоматизированного метода.

Осмотическая резистентность эритроцитов: что это такое, определение, стойкость, норма, устойчивость

Для оценки физико-химических свойств эритроцитов исследуют стойкость (резистентность) эритроцитов к различным воздействиям. Наибольшее распространение в клинической практике получило исследование осмотической резистентности эритроцитов.

Унифицированный метод определения осмотической резистентности эритроцитов
в модификации Л. И. Идельсона (1974).

Принцип

Количественное определение степени гемолиза эритроцитов в забуферных гипотонических растворах хлорида натрия.

Реактивы

Основной раствор (по своей осмотической концентрации соответствует 10 % раствору хлорида натрия) имеет рН 7,4, состав раствора: двузамещенный фосфат натрия (Na₂HPО₄)—27,31 г (или Na₂HPО₄*2H₂O— 34,23, г), однозамещенный фосфат натрия (NaH₂PО₄*2H₂О)—4,86 г, хлорид натрия— 180 г, дистиллированная вода — до 2 л. Раствор можно хранить в закрытой посуде в холодильнике в течение нескольких месяцев.

Основной раствор разводят в 10 раз и получают раствор, соответствующий по своей осмотической концентрации 1 % раствору хлорида натрия. Из этого раствора готовят рабочие растворы хлорида натрия следующих концентраций: 0,85; 0,75; 0,70; 0,65; 0,60; 0,55; 0,50; 0,45; 0,40; 0,35; 0,30; 0,20; 0,10%. Можно приготовить по 100 мл этих рабочих растворов и сохранять их в холодильнике. Годны в течение 2 нед.

Специальное оборудование

1. Фотоэлектроколориметр.
2. Термостат на 37 °С.

Ход определения

В две стерильные пробирки с предварительно внесенными 2 каплями гепарина берут по 1,5 мл крови, перемешивают и одну используют для исследования, вторую — оставляют на сутки в термостате. В ряд центрифужных пробирок (14 штук) разливают по 5 мл рабочих растворов хлорида натрия концентрации от 1 до 0,10 %. В каждую центрифужную пробирку добавляют по 0,02 мл перемешанной гепаринизированной крови и оставляют при комнатной температуре на 30 мин. Центрифугируют смесь крови с растворами хлорида натрия при 2000 об/мин в течение 5 мин. Из каждой пробирки сливают надосадочную жидкость и измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 500—560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 10 мм против холостой пробы.

Холостая проба — надосадочная жидкость в пробирке, содержащей 1 % раствор хлорида натрия.

Расчет

За 100% гемолиз принимают гемолиз в пробирке, содержащей 0,1 % раствор хлорида натрия. Вычисляют процент гемолиза в каждой пробирке, сравнивая величины экстинкции надосадочной жидкости с экстинкцией, принятой за 100 %, по формуле:

Процент гемолиза=Е_х*100 / Е_1, где
Е₁ — экстинкция надосадочной жидкости в пробирке с 0,1% раствором хлорида натрия;
Е_Х — экстинкция исследуемой пробы;
100 — процент гемолиза в пробирке с 0,1 % раствором хлорида натрия.

На следующий день повторяют исследование с кровью, инкубированной 24 ч при 37 °С.

Нормальные величины

У здоровых в свежей крови начало гемолиза отмечают при концентрации хлорида натрия 0,50—0,45 %, а полный гемолиз — при 0,40—0,35 % растворе хлорида натрия.

Клиническое значение

Исследование проводят при подозрении на гемолитическую анемию. Понижение осмотической резистентности, т. е. появление гемолиза эритроцитов при более высокой, чем в норме, концентрации хлорида натрия (0,70—0,75%), наблюдается при наследственном микросфероцитозе и некоторых наследственных несфероцитарных гемолитических анемиях, а также иногда при аутоиммунной гемолитической анемии. В ряде случаев понижение осмотической резистентности выявляется только при исследовании инкубированной крови. Повышение осмотической резистентности характерно для талассемии, гемоглобинопатий.

Литература.

Идельсон Л. И. В кн.:Справочник по функциональной диагностике / Под ред. И. А. Кассирского.— М., Медицина, 1970, с. 401.

Осмотическая резистентность эритроцитов

Под резистентностью эритроцитов понимают их устойчивость к различным разрушающим факторам: механическим, тепловым и другим. Особое значение в лабораторных исследованиях имеет осмотическая резистентность эритроцитов, то есть устойчивость к гипотоническим растворам NaCl разной концентрации. С помощью специального теста определяют, при какой концентрации хлорида натрия начинается распад красных кровяных телец (гемолиз).

Эритроциты для нормального функционирования должны сопротивляться осмотическому давлению, то есть должны быть прочными. Способность к сопротивлению и называется осмотической устойчивостью, или резистентностью. Если красные тельца становятся слабыми, иммунная система их маркирует как отработанный материал и удаляет из организма.

Выделяют резистентность максимальную и минимальную. Максимальная соответствует концентрации гипотонического раствора NaCl, при которой в течение 3-х часов происходит гемолиз всех красных клеток. Минимальная определятся концентрацией раствора, при которой разрушаются наименее устойчивые эритроциты.

Что такое физраствор?

Физраствор – это дистиллированная вода с растворенной в ней поваренной солью. Физиологический раствор с концентрацией 0,85 процентов называют изотоническим. В нем разрушения эритроцитов не происходит.

Если концентрация соли ниже, раствор называют гипотоническим, если выше – гипертоническим. При помещении в такие растворы эритроциты начинают разрушаться. В гипертоническом, или гиперосмотическом, они теряют воду и сморщиваются. В гипотоническом, или гипоосмотическом, они поглощают воду и набухают.

Как проводится анализ?

Чтобы провести пробы на осмотическую резистентность эритроцитов, в пробирки помещают гипотонический раствор NaCl разной концентрации (от 0,7 % до 0,22%). В каждую пробирку добавляют одинаковое количество крови, как правило – 0, 02 мл. В течение часа держат при комнатной температуре, после чего центрифугируют и по цвету раствора определяют начало разрушения эритроцитов и полный гемолиз. Если раствор слегка порозовел, это говорит о начале разрушения. При полном распаде раствор приобретает ярко-красный цвет.

В результате получают два параметра – максимальную и минимальную резистентность, которая выражается в процентах.

Норма

Для взрослых людей нормой считается:

• максимальная резистентность – от 0,34% до 0,32%;
• минимальная – от 0,48% до 0,46%.

У детей до двух лет осмотическая устойчивость в норме выше, чем у более старших. У пожилых людей – немного ниже нормы.

Причины отклонения от нормы

Причин отклонения от нормы много. Максимальная резистентность (ниже 0,32%) наблюдается при:

• талассемии;
• некоторых случаях полицитемии;
• гемоглобинопатии;
• спленэктомии;
• массивных кровотечениях;
• застойной желтухе;
• гемоглобинозе;
• атеросклерозе;
• злокачественных опухолях ЖКТ.

Поведение эритроцитов в гипертоническом, изотоническом и гипотоническом растворе

Минимальная осмотическая стойкость (выше 0,48%) связана:

• с гемолитической анемией новорожденных;
• с отравлением свинцом;
• с гемолитической анемией наследственной.

Незначительное снижение может происходить при следующих состояниях:

• туберкулезе;
• лейкозе;
• циррозе печени;
• некоторых случаях полицитемии.

К причинам снижения осмотической резистентности также можно отнести:

• присутствие в крови шарообразных эритроцитов, что обусловлено генетически;
• сердечную недостаточность, при которой красные клетки набухают, принимают сферическую форму, что сокращает их продолжительность жизни;
• старение эритроцитов, завершающий этап их жизни, во время которого они приобретают шарообразную форму, при этом проницаемость их стенок значительно увеличивается.

Признаки нарушения осмотической устойчивости

Симптомы такого отклонения бывают следующими:

• повышение температуры тела, иногда до высоких значений;
• быстрая утомляемость;
• плохой аппетит;
• общая слабость;
• бледность слизистых оболочек;
• снижение веса;
• сонливость.

Сфероциты (шарообразные эритроциты) менее устойчивы к осмотическому давлению

Зависимость резистентности от формы и зрелости эритроцита

Осмотическая стойкость зависит от формы и возраста клеток. В норме эритроциты имеют невысокий индекс сферичности, но в крови могут присутствовать элементы шарообразной формы, которые отличаются более низкой устойчивостью к разрушению. При такой форме значительно снижается резистентность, которая в этом случае составляет 0,4-0,6 % при норме 0,32-0,44. Сферическая форма может быть наследственно обусловлена. Кроме того, она наблюдается у клеток, которые завершают свой жизненный цикл.

Вывод

Таким образом, можно сделать вывод о том, что более резистентные – это молодые красные тельца, появляющиеся в крови после выхода из костного мозга и имеющие небольшой индекс сферичности.